小鼠模型中光血栓性卒中的建模:通过小鼠颅骨进行激光照射的技术,在给予光敏染料后诱导光血栓形成

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首先,将麻醉后的小鼠固定在立体定位仪中。连接探头以监测小鼠体温,并使用加热垫调节其体温。

接下来,对手术部位进行消毒,并做一纵向切口以暴露颅骨。

刮除颅骨表面的骨膜——即覆盖在颅骨表面的一层结缔组织。

确定冠状缝,并从前囟(冠状缝与矢状缝的交点)标记感兴趣的位置。

在标记区域贴上带有小孔的胶带,以限制激光照射时的暴露面积。然后,将所需光敏染料注入小鼠腹腔内。

注射的染料分子通过循环系统到达大脑。

接下来,将合适的激光光源置于标记区域上方,并照射指定时长。照射后,循环中的染料被激活并产生高活性的氧物种。这些活性物质通过损伤照射区域内血管中内皮细胞的细胞膜而发挥作用。

内皮细胞损伤会促进血小板的局部活化和聚集,进而形成血栓,中断局部脑血流。随后,用生理盐水重新水化颅骨。缝合手术切口,并将小鼠放回笼中。

脑血流中断会损伤脑组织,导致小鼠脑功能障碍。

测量小鼠的体重以调整需注射的玫瑰红染料剂量。设置相应的反馈控制加热垫以维持小鼠体温。当小鼠完全麻醉并固定于立体定位仪后,轻柔插入直肠探针,以在手术过程中持续监测小鼠体温。将右泛醇眼膏涂抹于双眼,并使用消毒剂清洁皮肤及周围毛发。

使用剪刀做一个2.0至2.5厘米的纵向切口,并牵拉组织以暴露颅骨。用棉签轻轻去除骨膜,定位冠状缝。打开561纳米激光器时佩戴护目镜,并在前囟左侧+3毫米处做标记。然后关闭激光器,将带有直径4毫米孔洞的贴片固定在已标记的坐标位置。

通过腹腔注射将玫瑰红染料注入小鼠体内。将激光束置于距离颅骨4至5厘米的位置。打开激光仪,照射颅骨20分钟。使用两滴0.9%生理盐水对颅骨进行再水化。缝合伤口后,将小鼠置于37摄氏度的恢复室中,使其从麻醉状态恢复。一小时后,将小鼠放回温度可控房间内的笼子中。