顺行灌注模型：一种用于离体小鼠心脏灌注的离体实验技术

首先将麻醉后的小鼠置于仰卧位。解剖胸腔以暴露心脏。使用装有宽口吸头的移液器，施加负压，将心脏从鼠体内吸入吸头中。在主动脉处切除心脏，以完成从鼠体内的摘取。

将分离的心脏浸入含有抗凝剂的营养丰富的缓冲液烧杯中。缓冲液中的抗凝剂与心肌细胞（即心脏肌细胞）中的钙离子形成复合物，从而停止心肌的收缩并防止血液凝固。

接下来，将心脏的心尖朝下放置在盛有适当缓冲液的培养皿中的心脏支架上。在心房上方夹住主动脉，并将夹好的心脏转移至灌注板。

随后，取一支含有适当灌注缓冲液的注射器-针头组件。将针头插入左心室，刺穿心室腔。

主动脉被夹闭后，心室内注射使主动脉瓣承受压力而打开。随后，缓冲液沿顺行方向将血液冲洗通过冠状动脉，充分灌注心肌。最后，缓冲液经由肺静脉流出。由此可获得成功灌注的心脏，用于后续实验应用。

对于小鼠心脏的采集，在确认安乐死后，剃除腹部毛发，迅速打开胸腔以暴露心脏，使用剪切尖端至心脏大小的塑料移液管，将心脏吸入移液管中。抬起移液管以腾出足够空间插入弯头剪刀，从背侧用剪刀切除心脏，注意避免损伤心房。

立即将心脏放入含有冰冻 CIB EGTA 的 30 毫升玻璃烧杯中，持续约 1 分钟。当心脏收缩停止后，将心脏转移至含有冰冻 CIB EGTA 的 35 毫升培养皿中，并去除肺组织及其他可见组织。

将初步清洗过的心脏放置于装有预冷的含EGTA细胞内液（CIB EGTA）的心脏支架上，心尖朝下，并将支架置于体视显微镜下。去除主动脉周围的脂肪和结缔组织。如果切断的主动脉过长，可在头臂动脉下方修剪主动脉，并调整心脏方向，使心室前表面朝前。用镊子提起主动脉末端，使用小型血管夹在靠近心房处夹闭主动脉，同时轻轻下压心房。

然后，将夹住的心脏放置在灌注板上，心室面朝上，并用几滴CIB EGTA溶液润湿心脏。进行顺行灌注时，将装有预热CIB EGTA溶液的20毫升注射器连接至一根柔性延长管和一支带刻度的注射针，装入输液泵中，并以0.5毫升/分钟的流速启动泵。当注射针和泵管内均充满液体后，将注射针放置在灌注板上，使针头斜面较短的一侧朝前，缓慢滑动针头直至其刚好接触心脏心尖。

小心地将针头插入左心室心尖附近，进入心室腔，注意不要扭曲针头或使其脱离载板，同时观察标记以估计针头插入的深度。当针头插入到位后，血液应开始从冠状动脉流出。

使用胶带将注射针固定在平板上，并将泵速提高至1毫升每分钟。若心脏灌注成功，则在心外膜下方应可见毛细血管中缓冲液的流动。