从小鼠中提取视网膜杯:一种获取完整小鼠眼球视网膜杯的外科手术方法

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小鼠的眼睛由三层结构覆盖:最外层的纤维性巩膜、中间的脉络膜以及最内层的视网膜。视网膜与晶状体之间呈杯状的腔隙内含有玻璃体液——一种胶状介质,有助于将光线传递至视网膜。  随后,视网膜通过视神经将产生的视觉信息传送到大脑。

为提取视网膜杯,取一只已处死的小鼠并摘除其眼球。将眼球浸入含有适当冰冻缓冲液的培养皿中,以防止组织降解。将培养皿置于解剖显微镜下。

剪除眼球基部残留的视神经。在视网膜与角膜交界处做一小切口。  — 眼晶状体周围的透明覆盖层。通过此开口,沿视网膜-角膜连接处进行完整的环形切割,以分离晶状体和玻璃体凝胶。

移除晶状体和玻璃体,获得一个半圆形的眼杯,其内壁由视网膜、脉络膜和巩膜组成。在眼杯的巩膜部分进行多处浅层切割。利用这些切口分离外层眼组织,以获取完整的视网膜杯,用于后续实验操作。

从已处死的成年小鼠身上摘除眼球,并将其置于含有冰冻 PBS 的培养皿中,然后将培养皿置于解剖显微镜下。使用显微剪剪断视神经,随后仔细清除附着在眼球外侧的外直肌。

使用30号针头在角膜边缘打一个小孔。然后用精细解剖显微剪刀沿角膜边缘做环形剪切。用尖头解剖镊子将角膜、晶状体和玻璃体从眼球杯中移除。使用精细解剖显微剪刀在眼球杯边缘的巩膜层上做数个小切口。用两把尖头解剖镊子分别夹住两侧的巩膜组织,小心地牵拉巩膜层,将其从神经视网膜上剥离。沿眼球杯周围重复此操作,直至完全去除巩膜,获得完整的视网膜杯。