小鼠肺动脉瓣膜的加压固定：一种在闭合构象下分离并化学固定的实验方法

首先，将已处死的小鼠固定于仰卧位。沿胸部侧壁切开，以进入胸腔并暴露心脏。切除右心房，并向左心室注入生理盐水，以清除心脏中的血液。

切断主要血管以断开血管连接。进一步地，在距离心室-动脉连接处适当距离处切开肺动脉，该处将作为加压的通道。去除心室，使心室侧暴露于大气压下。

现在，将加压导管固定至肺动脉，确保心室-动脉连接处与导管末端之间留有足够间隙，以便在加压过程中瓣膜瓣叶能够自由活动。

将装有生理盐水的储液器连接至导管，储液器应固定在相对于肺动脉瓣的特定高度，该高度根据拟施加于瓣膜动脉侧的静水压计算得出。由于在动脉侧施加了静水压，液体单向流动，导致瓣叶闭合以及肺动脉主干扩张。

随后，将适当的固定剂引入储液器并继续灌注。灌注的固定剂可稳定细胞形态和组织结构。 

将浸有固定液的纱布覆盖在组织上，以固定瓣膜周围的组织并防止干燥。将固定的瓣膜保存在固定液中，直至使用。

首先对小鼠解剖所需器械进行高压灭菌，包括精细剪刀、显微镊子、微血管夹、持夹镊子、显微持针器、弹簧剪和牵开器。

处死成年 C57 Black 6 小鼠后，将其仰卧置于托盘上，用胶带固定四肢，进行开胸术。去除多余脂肪组织和筋膜以暴露心脏，切除右心房，用室温生理盐水灌注左心室。

切断上腔静脉、下腔静脉、肺动脉和主动脉，完整取出心脏，并在心室-动脉连接处上方约2毫米处剪断，该部分将作为加压的通路。

去除左心室和右心室，使心腔暴露于大气压下，确保去除心室时不影响肺动脉干结构。将加压导管与肺动脉进行吻合，导管末端与窦-管交界处之间保留约1毫米的距离，以适应瓣叶和肺动脉干的大幅度运动。

将储液器升至相近的生理压力，并用生理盐水溶液填充。测试流通系统，确保无堵塞或气泡。将一个三通阀连接至吻合的肺动脉瓣，并通过切换流出道确保管路中有足够的液体流过。当流量充足后，将流出道切换至吻合的肺动脉瓣，通过观察肺动脉干的扩张确认肺动脉干已加压。

确认肺动脉干加压后，逐渐加入初固定液，直至盐水溶液储液器容量的25%被排出。用固定液浸湿的纱布覆盖组织样本，防止干燥。灌注固定液3小时，并及时补充储液器以维持恒定压力。

灌流后，将心脏瓣膜置于固定液中，4摄氏度保存，可保存至多1周，直至使用。