肌纤维分离：从小鼠趾长伸肌（EDL）中获取单根肌纤维的技术

取一只已处死的小鼠，仰卧位放置。对其后肢进行消毒。手术去除皮肤及筋膜——皮肤下方的一层薄结缔组织膜，以暴露其下的后肢肌肉。

在胫骨外侧定位胫骨前肌（tibialis anterior，TA）。握住 TA 的远端肌腱，将肌肉从下方组织中分离。在靠近膝关节处切断肌肉，以切除 TA 肌肉，从而暴露位于后肢前部 compartment 的趾长伸肌（extensor digitorum longus，EDL）。

切开远端趾长伸肌（EDL）肌腱，并将EDL肌肉向膝关节方向牵拉。切断近端EDL肌腱以完整剥离EDL肌肉。将获取的肌肉转移至含有预热的、添加胶原酶的培养基的离心管中，孵育适当时间。胶原酶可降解肌肉内每条肌纤维（或称肌纤维）周围的结缔组织。此消化步骤可使肌纤维从肌肉内层松解。

孵育后，小心地将消化后的肌肉转移至含有预热培养基的多孔板中，以提高肌纤维的存活率。将多孔板置于体视显微镜的加热台上。随后，轻柔吹打消化后的肌肉，使单个肌纤维解离并释放到溶液中。

分离的EDL肌纤维可用于进一步的下游分析。

用70%乙醇喷洒所有器械以及小鼠的后肢。使用硬化精细弯剪和精细镊子去除皮肤，暴露下方肌肉。用精细弯镊去除周围筋膜，注意不要损伤下方肌肉。

为了分离胫骨前肌（tibialis anterior，简称 TA），用镊子夹住远端 TA 肌腱，并用精细剪刀将其剪断。在握住肌腱的同时，将 TA 向膝关节方向牵拉，并在靠近膝关节处剪断肌肉，以暴露趾长伸肌（EDL 肌肉）。

用弯头镊子提起远端趾长伸肌（EDL）肌腱，并用精细的Vannas弹簧剪刀剪断。通过轻轻将EDL肌肉向膝关节方向牵拉，暴露近端EDL肌腱，随后用剪刀切断近端肌腱。将EDL肌肉置于反应管中，在37°C循环水浴中孵育。当肌肉变得松散且可见单个肌纤维时，停止消化过程。

在配备加热板的体视显微镜下操作，使用大孔径移液管以预热的分离培养基冲洗肌肉组织。用大孔径移液管反复吹打肌肉，直至获得所需数量的游离肌纤维。