通过小脑延髓池插管向猪的小脑延髓池递送示踪分子:一种荧光示踪分子递送方法 关键词:示踪分子,小脑延髓池,插管,荧光示踪剂,脑脊液,猪,中枢神经系统,药物递送

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脊椎动物的大脑中存在一种类似于淋巴系统的特殊液体交换系统,称为类淋巴系统(glymphatic system)。在该系统中,脑脊液(CSF)进入动脉周围间隙,通过星形胶质细胞终足中特化的通道实现溶质交换。携带溶质的脑脊液随后流入静脉周围间隙,从而将溶质从脑组织中清除。这一通路对脑生理功能具有重要意义,可利用荧光示踪分子进行可视化观察。

首先,将一只麻醉后的猪置于俯卧位,使其头部向上屈曲。在枕骨嵴下方做一切口。牵开肌肉以暴露小脑延髓池——即小脑与延髓之间的蛛网膜下腔开口。

小心地将套管穿过硬脑膜插入小脑延髓池。在套管周围涂抹牙科胶,并使其凝固。随后,以适当速率将悬浮于人工脑脊液中的荧光示踪分子注入。若在套管基部观察到明显搏动的示踪剂溶液,则表明注入成功。

注射后,复位各组织层并缝合切口。在切口处覆盖湿棉纱布以减少热量散失。让示踪分子循环所需的时间。在荧光显微镜下观察时,示踪分子有助于显示脑脊液在类淋巴系统中的分布情况。

确保一人抬高并屈曲动物的头部与颈部,另一人触诊枕大池,注意其解剖位置。将一根22号导管通过硬脑膜,以与纵轴成斜角的方向缓慢而谨慎地插入枕大池。随后,将针芯从导管中退出,并在导管锁上安装一个帽盖。

首先在导管进入组织的部位涂抹氰基丙烯酸酯胶水和促进剂。然后涂抹牙科水泥。等待五分钟,使水泥固化。小心地从导管上取下帽盖。使用10厘米延长管,将导管连接至含有示踪剂的静脉输液三通管的雄性接头端。

以每分钟100 µL的速度手动或使用微量输注泵缓慢注射示踪剂。移除静脉通路接头,更换为封闭帽。检查示踪剂是否可见,并在导管基部随脉搏搏动。然后,在动物颈部下方放置沙袋,以保持一定的屈曲状态。

松开头部,让动物处于静息的俯卧位。撤去自持式拉钩,复位肌肉组织。使用手术巾钳将皮肤在肌肉上方闭合。先用纱布覆盖,再用毯子盖住巾钳和切口,以减少热量散失。让示踪剂循环所需的时间。