0 次观看 • 4:58 分钟 • July 8th, 2025
哺乳动物心脏组织切片——存活的哺乳动物心室心脏组织的超薄切片——保留了心脏组织的结构和生理特性，使其成为转化心血管研究的模型系统。
为制备猪心脏组织切片，将新鲜获取的猪心脏置于含有冷停搏液的托盘中，该溶液可暂时终止心脏活动，从而保护心脏。解剖心脏以分离左心室，随后将其切割成大小均匀的组织块。使用组织胶将组织块平整地固定在振动切片机样品架底部已固定的预制琼脂块上，使心脏的外层——心外膜朝下。
将样本架转移至已冷却、充满含氧缓冲液的振动切片机切片槽中，以维持组织的生理状态，并在切片过程中保持低温。根据所需的组织切片厚度，调整振动切片机刀片的高度和切割参数。运行过程中，振动刀片向前推进并穿透组织块。
琼脂在切片过程中为组织块提供稳定性，并使刀片沿单一路径移动，从而生成具有排列整齐心肌纤维的均匀完整心脏组织切片。收集组织切片并转移至充氧缓冲液浴中，以减少组织损伤。心脏组织切片现已准备好进行后续分析。
为获取猪心脏组织切片，首先在振动切片机的组织浴冷却套中加入冰块，并向浴槽中加入台氏液。使用一个1升的塑料瓶收集组织浴冷却套融化的冰水，并将猪心脏转移至生物安全柜中盛有1升新鲜、低温停跳液的托盘内。
使用可伸缩的无菌手术刀解剖心脏以分离左心室，并用矩形剃须刀片将左心室切成 1 至 2 立方厘米的组织块。留出一个组织块用于切片，将其余的组织块放入盛有冰冷台氏液的 50 毫升离心管中，并置于冰上。
轻轻按摩保留的组织块，并在振动切片机的金属样品托上滴加1至2滴组织胶。取一块表面面积约1平方厘米的4%琼脂块，粘附于胶上，再在琼脂上滴加1至2滴组织胶。
将心脏组织块附着于琼脂上，心外膜朝下，尽量使组织平整地贴附于持样器上，并将带有心脏组织块的持样器放入振动切片机的切片浴中。
必须将心脏组织块用琼脂固定，使心外膜一侧朝下贴在组织胶上，并确保组织尽可能平整。
然后，将氧气管连接至切片浴槽和装有台氏液的金属托盘，并在金属托盘上放置40微米的细胞筛网，以收集切片过程中产生的心脏组织切片。使用振动切片机的操作软件调节刀片和样品的高度，使刀片接近组织顶部，但位于乳头肌下方，同时确保液体覆盖组织和刀片。
选择“前进”以调整开始切片组织的位置。按“切片”键可提高速度，并使用旋钮将刀片移向组织边缘。再次按“切片”键以停止，然后按“前进”以终止该过程。接着，根据指示调整切割参数，再按“切片”键开始切片组织。当刀片到达组织末端但尚未触及样本架末端时，再次按“切片”键停止，然后按“返回”键回到起始位置。
当切片达到全长且质量良好时，使用装有冷Tyrode's溶液的塑料巴斯德吸管，轻轻从浴槽中收集组织，必要时用镊子和弹簧剪将切片从心脏上分离。将每片收集的组织置于含氧Tyrode's溶液浴中的单细胞筛网上，并用吸管中的溶液将组织压在筛网表面。