0 次观看 • 3:02 分钟 • July 8th, 2025
猪卵母细胞被一层致密的多层卵丘细胞包围,形成卵丘-卵母细胞复合体(COC)。最内层的卵丘细胞通过突起穿过卵母细胞的透明带。这些突起形成间隙连接和中间连接,有助于卵母细胞与周围卵丘细胞之间的分子胞间转运。这种双向相互作用维持了COC的活力,这是体外受精(IVF)成功的关键决定因素。
为分离卵丘-卵母细胞复合体(COCs),将少量猪卵巢卵泡浸入含有成熟培养基的培养皿中。该培养基包含体外卵母细胞成熟所必需的激素。解剖卵巢卵泡,使卵丘-卵母细胞复合体及卵泡液释放至培养皿中。该卵泡液可为成熟培养基补充额外的营养物质和激素,对卵母细胞发育潜能至关重要。
吸出释放的卵泡内容物,并转移至另一个培养皿中。在显微镜下观察培养皿,识别形态正常的未受损COCs,其特征为卵母细胞呈圆形,胞质中等颗粒化,极体完整且周围被卵丘细胞包绕。
分离一个卵丘-卵母细胞复合体(COC),并将其转移至含有成熟培养基的IVF培养板中央孔中。将培养板置于最适温度下保存,以备后续使用。
为了从中小型卵泡中分离卵丘-卵母细胞复合体(COCs),将两到三个卵巢转移至一个盛有HM的无菌10 cm培养皿中。用无菌外科15号刀片轻轻切开突出的卵巢卵泡表面,使卵泡液及COCs流出至培养皿中。使用连接一次性注射器的28号针头吸取卵泡内容物,并将其转移至另一个培养皿中。
准备体外受精(IVF)培养皿时,向中心孔中加入1毫升HM,并在外部环形区域放置3至4滴HM。然后,使用聚碳酸酯微量移液管将无损伤的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)转移至外部环形区域的HM液滴中,并短暂冲洗3至4次。操作完成后,将它们 individually 转移至中心孔中。将IVF培养板存放于培养箱中。
本文展示了一种从猪卵巢中分离卵丘-卵母细胞复合体(COCs)的详细方案。分离得到的COCs对于体外受精(IVF)研究和生育治疗至关重要,因为它们能够维持卵母细胞的活力和发育潜能。
可靠的猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)分离技术是生殖生物学和生育力研究早期阶段的基础,可实现体外受精(IVF)研究的可控性。该技术有助于准确预测卵母细胞的存活能力及发育潜能,直接影响检测方法的建立和转化模型的可靠性。标准化的COC制备对于生殖技术流程中可扩展且可重复的实验操作至关重要。
该COC分离方案适用于早期发现与检测开发之间的衔接,为体外受精、成熟及发育潜能研究提供基础材料。
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最后更新:29 八月 2026