猪卵丘卵母细胞复合体的分离：一种用于体外受精的从猪卵巢卵泡中分离卵丘卵母细胞复合体的技术

猪卵母细胞被一层致密的多层卵丘细胞包围，形成卵丘-卵母细胞复合体（COC）。最内层的卵丘细胞通过突起穿过卵母细胞的透明带。这些突起形成间隙连接和中间连接，有助于卵母细胞与周围卵丘细胞之间的分子胞间转运。这种双向相互作用维持了COC的活力，这是体外受精（IVF）成功的关键决定因素。

为分离卵丘-卵母细胞复合体（COCs），将少量猪卵巢卵泡浸入含有成熟培养基的培养皿中。该培养基包含体外卵母细胞成熟所必需的激素。解剖卵巢卵泡，使卵丘-卵母细胞复合体及卵泡液释放至培养皿中。该卵泡液可为成熟培养基补充额外的营养物质和激素，对卵母细胞发育潜能至关重要。

吸出释放的卵泡内容物，并转移至另一个培养皿中。在显微镜下观察培养皿，识别形态正常的未受损COCs，其特征为卵母细胞呈圆形，胞质中等颗粒化，极体完整且周围被卵丘细胞包绕。

分离一个卵丘-卵母细胞复合体（COC），并将其转移至含有成熟培养基的IVF培养板中央孔中。将培养板置于最适温度下保存，以备后续使用。

为了从中小型卵泡中分离卵丘-卵母细胞复合体（COCs），将两到三个卵巢转移至一个盛有HM的无菌10 cm培养皿中。用无菌外科15号刀片轻轻切开突出的卵巢卵泡表面，使卵泡液及COCs流出至培养皿中。使用连接一次性注射器的28号针头吸取卵泡内容物，并将其转移至另一个培养皿中。

准备体外受精（IVF）培养皿时，向中心孔中加入1毫升HM，并在外部环形区域放置3至4滴HM。然后，使用聚碳酸酯微量移液管将无损伤的卵丘-卵母细胞复合体（COCs）转移至外部环形区域的HM液滴中，并短暂冲洗3至4次。操作完成后，将它们 individually 转移至中心孔中。将IVF培养板存放于培养箱中。