Liquid Marble 微型生物反应器系统:用于猪卵母细胞包埋的 3D 培养方案

0 次观看3:29 分钟 • July 8th, 2025

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培养皿中制备氟化乙烯丙烯或FEP粉末床。在FEP粉末上加入一滴含有卵丘-卵母细胞复合物或COC的成熟培养基。将液滴轻轻地滚动在粉末上,形成液态弹珠或 LM。FEP 粉末形成疏水多孔外壳,允许内部液体与周围环境之间进行气体交换。

现在,收集 LM 装置并将其转移到 IVF 培养皿的中央孔中。在外环中加入无菌水以保持 COC 水合。然后,在生理条件下孵育LM以使卵母细胞成熟。

接下来,取出用过的培养基并加入新鲜的成熟培养基。直接液体接触会破坏疏水性 FEP 壳并破坏 LM 以释放 COC。将释放的COC转移到含有一滴新鲜成熟培养基的新培养皿中,并洗涤它们以去除FEP颗粒。

洗涤后,将COC和新鲜培养基转移到FEP粉末床上。滚动滴剂以涂上粉末。最后,将LM转移到IVF培养皿中。FEP 粉末涂层 LM 可维持卵母细胞的 3D 结构并增强其活力。

30毫米培养皿中制作5克FEP粉末的床。将含有 3 至 5 个 COC 的单个成熟培养基液滴分配到 FEP 粉末上。以圆周运动轻轻旋转板,以确保颗粒完全覆盖液滴表面并形成液态弹珠或 LM。

准备几个 60 毫米的试管婴儿培养皿,并在外环中加入 3 至 4 毫升无菌水以形成湿度室。用 1,000 微升移液器拾取成型的 LM 并将其放入中心孔中。将弹珠在 38 摄氏度下在 5% 二氧化碳培养箱中孵育四天。

要更换培养基,请在每个 LM 上涂抹 30 微升成熟培养基,这将使其扩散。当大理石内容物溶解时,将从生物反应器释放的COC转移到培养皿中的一滴新鲜成熟培养基中。在成熟培养基中洗涤3至4次后,将COCs与30微升新鲜培养基一起转移到FEP粉末床上。

轻轻地以

圆周运动旋转板,以确保粉末颗粒完全覆盖液滴表面并形成新的LM。然后,将 LM 转移到 IVF 培养皿中。

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最后更新:1 八月 2026