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进行胚胎移植时,选取一只未受精的雌性家兔。通过肌肉注射给予其促性腺激素释放激素的合成类似物。该操作可诱导排卵,并使家兔进入假孕状态——即机体表现出类似妊娠的症状,但并无 viable 胚胎,从而提高后续步骤中胚胎的存活几率。
将兔子麻醉后仰卧放置,呈头低脚高的倾斜体位。该体位可使腹腔脏器上移,从而与生殖器官之间形成足够的操作间隙。在腹部前侧区域做一切口,由此处将内窥镜摄像头插入腹膜腔,以观察生殖系统。
现在,取一个含有可存活胚胎的注射器-导管组件。将针头插入靠近输卵管的位置——输卵管是将胚胎输送至子宫的管道。将导管向前推进,穿过漏斗状腔隙(即漏斗部)末端,直至到达输卵管壶腹部——输卵管的一个长管状部位。
将胚胎释放到壶腹部。撤回导管并取出摄像头。封闭切口部位。将兔子转移至笼中并进行监测。胚胎从壶腹部向子宫角迁移——即发生着床的子宫部位。健康的胚胎会成功着床,最终实现成功妊娠。
在移植当天,在体视显微镜下用37摄氏度的基础培养基冲洗新鲜或解冻的胚胎,并将一根适当配置的17号硬膜外导管连接到1毫升注射器上。将一厘米长的基础培养基吸入导管,随后吸入一个小气泡。然后吸入5至7个胚胎及10微升基础培养基,最后再吸入一个小气泡,末端保留一厘米长的基础培养基。
将胚胎装载完毕后,将一只麻醉的受体兔放入笼中并置于加热台上,并在动物的眼睛上涂抹眼膏。确认兔对足底反射无反应后,剃除腹部腹侧的毛发,用氯己定葡萄糖酸盐皂液清洁手术区域,并去除残留的毛发。
用无菌洞巾覆盖手术区域,在手术部位留出开口,将一个内镜套管针插入腹腔,插入深度为5厘米,位置位于剑突远端2厘米处,并使用压力调节的机械气腹机充气膨胀腹膜腔。
将内窥镜摄像头插入内窥镜套管,将17号硬膜外穿刺针插入距漏斗部2至3厘米的腹股沟区域。通过硬膜外穿刺针将装载好的导管插入腹腔,并将硬膜外导管经壶腹部的漏斗部插入1至2厘米。
轻轻按压导管活塞,将胚胎释放至输卵管内。导管内的两个气泡均需排出。胚胎释放后立即取出导管,并抽吸并推出剩余培养液,以确认胚胎已全部释放。
确认胚胎成功移植后,拔除硬膜外针和内窥镜摄像头,并通过内窥镜套管释放腹腔内的二氧化碳。用氯己定溶液清洁套管穿刺切口,使用微晶铝和塑料敷料闭合伤口。随后,给予动物适当的抗生素和镇痛药物,并在动物完全恢复前持续监测。