基于CreER-LoxP系统的靶基因失活：一种在小鼠模型中实现靶基因敲除的他莫昔芬诱导型Cre重组酶系统

从一种基因工程小鼠模型开始，该模型具有经过修饰的基因组，其中目标基因两侧包含LoxP位点——即Cre重组酶可识别的特异性序列。进一步将编码器官特异性CreER重组酶的质粒载体转染该小鼠，从而使表达CreER重组酶的元件整合到肝细胞的基因组中。

表达的CreER重组酶是一种失活的融合蛋白，由Cre重组酶与雌激素受体ER的突变配体结合域融合而成，该蛋白可与细胞质中的热休克蛋白相互作用并结合。这种结合使CreER重组酶被限制在细胞质中。

使用乙醇和合适的油配制他莫昔芬（一种疏水性药物）溶液。然后将他莫昔芬溶液注射到小鼠腹部左下象限的腹腔内，以避免损伤腹腔器官。

注射的他莫昔芬在肝脏中被代谢为4-羟基他莫昔芬（4-OHT）。随后，作为选择性雌激素受体调节剂的4-OHT会与CreER重组酶的雌激素受体配体结合结构域结合，引起其构象改变。这导致CreER重组酶从热休克蛋白中释放出来。

激活的CreER重组酶会转位至细胞核内，并识别宿主基因组中的LoxP位点。CreER重组酶催化LoxP位点之间的特异性重组，导致目的基因被切除，从而实现组织特异性的基因敲除。

在尾静脉注射后10至15天开始诱导Cre重组酶表达，以确保未整合的载体被清除。将10毫克他莫昔芬溶解于40微升乙醇中，于55摄氏度孵育10分钟并伴随振荡。

涡旋数次直至他莫昔芬完全溶解，然后加入960 µL玉米油，在55 °C下孵育5分钟。冷却后，用带20号针头的1 mL胰岛素注射器吸取溶液，随后更换为27号针头。

注射时，首先用拇指和第二根手指轻轻抓住小鼠颈部皮肤使其背毛绷紧，同时将尾巴固定在手掌根部与第四、第五根手指之间，然后将0.1毫升溶液注射至腹部左下象限的腹腔内。