基于可诱导 Tet-On 调控系统的体内基因表达：小鼠模型中四环素诱导的目标基因转录激活系统

四环素-On（Tet-On）系统是一种条件性基因表达系统，在四环素或其类似物多西环素存在的情况下，可激活目的基因的表达。

从一只经过基因改造的小鼠开始，该小鼠的基因组经过修饰，在肝细胞或肝实质细胞中，由肝脏特异性启动子驱动，表达编码反向四环素控制的转录激活蛋白（rtTA）的基因。此外，该小鼠还包含一个目的基因，该基因受位于上游的四环素操纵子（tetO）序列调控，并与一个最小启动子选择性融合。tetO 与启动子共同构成四环素响应元件（TRE）。

表达的rtTA——一种由四环素阻遏蛋白tetR和病毒蛋白VP16的转录激活结构域组成的融合蛋白——可形成二聚体，这些二聚体处于非活性状态，无法与TRE中的tetO序列结合，从而阻止靶基因表达的激活。

配制含有强力霉素和蔗糖的溶液。添加蔗糖可提高溶液的适口性。过滤后，将强力霉素-蔗糖溶液作为饮用水提供给小鼠。所给予的强力霉素会在肝脏中蓄积。

在肝细胞中，多西环素与rtTA结合，引起构象改变，并增强其对tetO DNA结合位点的亲和力。与多西环素结合的rtTA的tetR DNA结合域与TRE元件中的tetO序列结合。VP16结构域进一步招募RNA聚合酶，从而启动转录，形成mRNA，并最终表达下游报告目的基因。

对于少于10天的实验，通过饮水持续给予多西环素，具体方案如下。首先，将5克蔗糖溶解于100毫升自来水中，并进行高压灭菌。

然后，将100毫克多西环素半琥珀酸盐溶解于15毫升锥形管中的5毫升蔗糖溶液中。接着，使用10毫升注射器通过0.2微米滤器对溶液进行无菌过滤，随后将过滤后的多西环素溶液加入剩余的95毫升蔗糖溶液中，并以此溶液替代小鼠的饮用水。每日检查，若溶液变浑浊应立即更换，因为浑浊表明有细菌过度生长。