将核酸导入贴壁培养细胞的珠粒加载法：一种将编码荧光蛋白的质粒导入贴壁哺乳动物细胞的技术

从培养板中取一培养皿贴壁的哺乳动物细胞。将经灭菌和碱处理的微米级玻璃珠转移至定制珠加载装置的腔室中。使用具有合适孔径的筛网覆盖腔室开口，以便在加载过程中允许玻璃珠通过。用成像室组件固定筛网。

移除培养板中的培养基。用移液器将编码荧光报告蛋白的质粒DNA悬浮液加入培养板中，使其均匀分布在细胞表面。使用珠子加载装置，将一层玻璃珠轻轻分散至细胞表面。用适当力度短暂轻敲培养板。

玻璃珠在贴壁细胞表面短暂滚动，而碱处理使细胞贴壁性降低。玻璃珠与细胞之间的碰撞产生的冲击力传递足够的应变，导致细胞膜局部破裂。这些形成的短暂微小孔隙有助于质粒DNA进入细胞，同时阻止大颗粒珠子进入。

在恢复期间，细胞膜重新封闭，恢复膜的完整性并包埋质粒DNA。向培养板中加入培养基，并小心吸除培养板中任何可见的漂浮微珠。孵育培养板。

成功转染并含有质粒DNA的细胞会表达荧光报告蛋白，可在荧光显微镜下观察到。

移除细胞中的培养基，并轻轻抽吸干净腔室边缘的所有培养基。然后将腔室倾斜约45度角，吸除中央微孔中残留的液滴。将珠子加载液轻轻移液至腔室中心的玻璃微孔中。

使用微珠加载装置将一层玻璃微珠轻轻分散在细胞表面。确保微珠完全覆盖细胞。用两根手指夹住培养腔，将其抬高约两英寸，然后用力下压，力度相当于将培养皿从该高度自由落体下落所产生的冲击力。

用移液器将培养基缓慢加回到腔室中，注意沿腔室的塑料侧壁加入。吸除悬浮的磁珠，同时避免扰动细胞。整个磁珠加载过程应相对快速地进行，以防止细胞在无培养基的情况下干燥。随后，将细胞置于培养箱中孵育 0.5 至 2 小时。