将核酸引入贴壁培养细胞的磁珠加载:一种将荧光蛋白编码质粒加载到贴壁哺乳动物细胞中的技术

首先在培养板中培养贴壁哺乳动物细胞。将经过灭菌碱处理的微米级玻璃珠转移到定制的微珠装载装置的腔室中。使用具有最佳尺寸开口的网状物覆盖腔室开口，以允许珠子在加载过程中通过。用成像室组件固定网格。

从板上取出介质。将荧光报告蛋白编码质粒 DNA 的悬浮液移液到板中，以均匀分布在细胞上。使用珠子装载装置，将单层玻璃珠轻轻分散到细胞上。用适当的力短暂敲击培养板。

玻璃珠在贴壁细胞顶部短暂滚动，而碱处理使它们对细胞的粘附性降低。磁珠和细胞之间碰撞的影响会传递足够的应变，从而在细胞膜中造成局部破坏。这些形成的小尺寸瞬时孔有助于质粒 DNA 摄取到细胞中，同时防止大珠子进入。

在恢复期间，细胞膜重新密封，恢复膜完整性并捕获质粒 DNA。将培养基添加到板中，并小心地从板上吸出任何可见的漂浮珠子。孵育板。

成功转染含有质粒DNA的细胞表达荧光报告蛋白，可以在荧光显微镜下观察

从细胞中取出培养基，并从腔室边缘周围轻轻吸出所有培养基。然后，将腔室倾斜约 45 度角，并去除中央微孔中剩余的培养基滴。将珠子上样溶液轻轻移液到腔室中心的玻璃微孔上。

使用磁珠加载装置将单层玻璃珠轻轻分散在细胞顶部。确保珠子完全覆盖细胞。用两根手指捏住腔室。将其抬起约两英寸，然后用大约相当于将盘子从该高度掉落的力将其牢牢放下。

缓慢移液到腔室的塑料侧，轻轻地将培养基添加回腔室中。吸出任何漂浮的珠子，而不干扰细胞。整个磁珠加载过程应相对较快地执行，因此细胞在没有培养基时不会变干。然后，将细胞在培养箱中孵育0.5至2小时。