基于重组腺相关病毒的基因递送：一种用于转基因递送及在啮齿类动物模型中实现心脏特异性表达的技术

重组腺相关病毒（rAAV）是一种经过基因改造的小型单链DNA病毒，可靶向特定细胞类型，并将其携带的遗传物质运送至宿主细胞核内，实现基因表达。

首先固定一只经低温麻醉的新生小鼠。对背部皮肤进行消毒，沿心肌特异性启动子，将携带目的转基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体皮下注射。该载体被吸收进入循环系统，并可到达包括心脏在内的远端器官。

在此过程中，重组病毒附着于心肌细胞表面，并通过内吞作用进入内体。在内体中，病毒衣壳部分解体，暴露出病毒的裂解蛋白。该蛋白在内体膜上形成孔道，使载体由此逃逸至细胞质中。

该载体沿细胞质中的微管移动，并通过核孔进入细胞核。进入细胞核后，病毒衣壳解聚，释放其基因组。随后，携带目的基因的单链DNA被转化为双链DNA。

DNA转录完成后，生成的mRNA进入细胞质。在此，mRNA进行翻译，表达心肌细胞中的目标蛋白。在荧光显微镜下观察来自不同器官的组织样本，以确定基因递送至心脏的效率和组织特异性。

根据文本方案确定病毒滴度后，用rAAV9制备工作液，病毒滴度为每毫升1-7 × 10¹² 粒子。用于处理新生小鼠时，取rAAV9溶液预先充满一支0.33 × 12.7毫升、带29号1/2英寸针头的胰岛素注射器，避免产生气泡。

将幼鼠进行冷冻麻醉后，用一只手的拇指和食指固定幼鼠。然后，用浸透70%异丙醇的棉签擦拭幼鼠背部皮肤。将注射器针头以5至10度的角度插入动物的前背侧皮下，随后注射50至70 µL的rAAV9溶液。