基于纳米刀的核酸递送技术：通过类病毒颗粒将Cas9-sgRNA复合物递送至靶细胞的方法

纳米刀（Nanoblades）是一类合成的类病毒颗粒，不含包裹的病毒遗传物质，因此可作为外源性货物进入宿主细胞的合适载体。这些纳米刀利用小鼠白血病病毒的逆转录病毒核心，并以外源性真核生产细胞的脂双层膜包裹，该脂双层膜来源于体外组装纳米刀所用的生产细胞。

核心包含与靶基因组序列特异性的sgRNA结合的Cas9酶。核心蛋白被包膜蛋白所包围，包膜蛋白含有穿过脂质双层的跨膜区（TM）。该跨膜区连接到一个细胞外糖蛋白性质的表面区（SU），后者从双层包膜中突出。

使用纳米刀片进行基因编辑时，取一培养皿贴壁生长的靶细胞，并加入纳米刀片溶液。在培养过程中，纳米刀片突出的SU结构域识别宿主细胞表面相应的受体并与之结合。这会导致SU结构域构象发生改变，从而促进其释放。

这些变化会触发跨膜结构域的构象改变，进而与宿主细胞膜结合。该结合使纳米刀靠近宿主细胞，促使病毒双层膜与宿主细胞膜融合，病毒核心随之进入细胞质。

进入细胞后，核心结构解体，释放出Cas9-sgRNA复合物，该复合物可在其靶位点进行基因组编辑。

使用纳米刀片转导靶细胞时，将细胞培养基更换为含有纯化纳米刀片的500微升培养基。细胞孵育4至6小时后，更换为正常体积的新鲜培养基。