逆转录病毒介导的基因转导：利用基因工程逆转录病毒载体在培养细胞中递送转基因的一种基因转移技术 关键词：逆转录病毒，基因转导，基因转移，转基因，病毒载体，培养细胞

为了用含有逆转录病毒载体的 RNA 转导宿主细胞，取一个含有包装好的载体并置于合适培养基中的离心管。每个载体包含一个病毒衣壳，其内部含有待整合到宿主基因组中的目的基因 RNA 互补链以及重要的病毒酶类。该衣壳被一层脂质双层膜包裹，以促进其进入宿主细胞。

在含有宿主细胞悬液的培养板孔中加入载体以及适当的转染试剂。盖上培养板。低速离心以进行旋转转导，使病毒载体更接近宿主细胞表面，从而提高转导效率。

同时，转染试剂中的多聚阳离子可中和病毒和宿主细胞表面的负电荷，促进病毒吸附至靶细胞。

因此，病毒表面的受体促进其与宿主细胞膜的融合。病毒衣壳进入细胞后破裂，将转基因RNA和病毒酶释放到细胞质中。

在细胞质内，病毒的逆转录酶将RNA转化为单链互补DNA，随后转变为双链前病毒DNA。生成的DNA进入细胞核。病毒整合酶介导前病毒DNA整合到宿主基因组中，从而形成被转导的细胞。

从病毒生产细胞系中收集新鲜的病毒上清液。此时，细胞应分布均匀，形态清晰。接下来，小心吸取含有骨髓细胞的6孔板中每个孔的上层2毫升培养基。注意避免吸出通常集中在孔中央的骨髓细胞。

向含有骨髓细胞的6孔板的每个孔中加入3毫升新鲜补充的病毒上清液。用塑料膜包裹板后，重复进行离心转导，然后将未包裹的板放入组织培养孵育箱中。在第3天24小时后，从孔中移除并更换2毫升培养基。