油红O染色：一种用于体外检测肝细胞中性脂质以识别肝脂肪变性的技术

肝脂肪变性是一种病理状态，其特征是肝细胞（一种主要的肝细胞类型）内脂肪过度积聚。这些脂肪以大小不等的脂滴形式沉积于肝细胞的细胞质中。

从结构上看，脂滴包含一个由中性疏水性脂肪（如甘油三酯和胆固醇酯）构成的核心。该核心周围包裹着一层磷脂单分子层，其上镶嵌有多种蛋白质。

为了观察脂肪沉积，取一个含有贴壁肝细胞培养物的多孔板。这些细胞经脂肪生成培养基预处理，以诱导细胞内脂滴的积聚。

加入所需浓度的多聚甲醛，使其扩散进入细胞并与蛋白质发生交联。此步骤可使蛋白酶失活，从而保存肝细胞结构。弃去多聚甲醛溶液，加入含有溶于异丙醇的有机染料的油红O溶液。

异丙醇作为微溶性油红O分子的载体溶剂，有助于染料分子进入固定的肝细胞，并最终到达脂滴。一旦进入细胞，由于染料对中性脂质具有更高的亲和力，便会从异丙醇中转移至中性脂质，形成染料-脂质复合物，从而使脂滴呈现红色着色。

弃去多余的染料，在显微镜下观察细胞。细胞内的脂滴呈深红色。

在24孔板的每个孔中放入一个细胞培养盖玻片，并按照文本稿件中的描述接种HepG2细胞。适当孵育后，用1毫升PBS洗涤细胞，弃去上清液。用1毫升含4%多聚甲醛的PBS固定细胞，在室温下孵育1小时。弃去多余的多聚甲醛，再用1毫升蒸馏水冲洗细胞。

然后加入 1 毫升 70% 异丙醇，孵育 5 分钟。弃去多余的异丙醇，加入 1 毫升油红 O 溶液，孵育 30 分钟。弃去多余的油红 O 溶液，再用 1 毫升蒸馏水冲洗。在显微镜下以 400 倍放大倍数观察细胞。