0 次观看 • 3:50 分钟 • July 8th, 2025
对于包膜病毒的负染，首先准备所需的病毒悬液。将病毒与戊二醛（一种化学固定剂）孵育。戊二醛穿透病毒后，会交联病毒的蛋白质和核酸，从而在保持病毒形态的同时使其失活，便于安全操作。将该混合液转移至多孔板中。
通过连接器将含有包囊的透射电子显微镜（TEM）载网连接到移液器上。使用该移液器将病毒-固定剂混合液吸入包囊中。孵育移液器组件，使病毒吸附到载网表面。
移除混合物。清洗胶囊，去除未结合的病毒和固定剂。用移液器将醋酸铀酰溶液（一种基于重金属的染色剂）加入胶囊中。孵育，使染色剂与病毒充分接触。
铀酰离子可结合病毒表面的特定膜糖蛋白和磷脂。这些离子能够穿透病毒并结合包裹基因组的核衣壳蛋白。这种结合可诱导重金属离子在病毒及其特定结构周围聚集和沉积。
分离胶囊。从载网上去除多余的染色剂，并风干。
在透射电子显微镜成像过程中，高能电子束穿过病毒，导致病毒中电子密度较高的染色区域散射更多的电子。然而，病毒整体的电子密度较低，使得电子能够穿透。成像系统对这些散射程度不同的电子进行处理，从而生成高对比度的图像。
经负染色的病毒在深色边缘背景下呈现较浅的外观，且核衣壳呈深色，有利于超微结构的观察。
首先，将病毒悬液与等体积的4%戊二醛混合，使戊二醛的终浓度为2%。使用固定剂在至少24小时内灭活病毒。对管子进行去污染处理，然后将其转移至BSL2-EM设施。
此后，将载有网格的捕获装置连接到移液器上。将混合物吸入胶囊中。将移液器侧放，使网格保持水平方向放置10分钟。
接下来，拿起移液器，将病毒混合物排入废液容器中。向离心柱中吸入 40 µL 去离子水，然后将水弃入废液容器中。重复此洗涤步骤三次。
此后，将 40 微升的 1% UA 或 1% PTA 吸入胶囊中，作用 30 秒。将胶囊从移液器上取下。使用滤纸将载网 blot-dry，然后让载网在空气中晾干。