软组织样品的曙红染色:一种基于曙红的小鼠全肾染色程序,用于可视化特定组织微结构

0 次观看3:14 分钟 • July 8th, 2025

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对于软组织微环境中的细胞质特异性染色,获得新鲜收获的小鼠肾脏。用含有甲醛、冰醋酸和甲醇的固定溶液处理。低温孵育。

甲醛穿透细胞,将蛋白质与蛋白质交联,将蛋白质与核酸交联。甲醇从组织中置换水分并凝固蛋白质。乙酸引起细胞内酸化和组织肿胀,从而抵消甲醇引起的组织收缩。

固定使酶失活并稳定组织形态以进行后续染色。使用缓冲液去除多余的固定剂。将组织与伊红Y(一种酸性染料)一起孵育。

曙红穿透固定细胞并进入细胞质。乙酸处理产生的细胞质酸性环境导致细胞质蛋白氨基的最大质子化。

具有

带负电荷的官能团的曙红与质子化的蛋白质基团静电相互作用,形成稳定的染料-蛋白质复合物,并在积累时将细胞质染成粉红色。孵育后,将染色的肾脏切成小块,然后在增加乙醇浓度的情况下进行组织脱水。

肾组织嵌入石蜡中。使用切片机获得薄组织切片。此外,重新水化切片以进行显微分析。

未染色的细胞核在粉红色染色的细胞质上呈白色,能够可视化肾脏微结构,例如近端回旋小管,包括具有刷状边界的上皮细胞,或集合管,这些细胞内衬有没有刷状边界的扁平上皮细胞。

首先固定软组织样本。用含有 9.5 毫升 4% 甲醛和 0.5 毫升冰醋酸的固定溶液填充 50 毫升离心管。将软组织样品加入离心管中,冷藏24至72小时。

冷藏后,用DPBS溶液洗涤软组织样品1小时。然后,将样品置于2毫升曙红Y染色溶液中染色,并在水平摇动板上孵育24小时。

第二天,小心地将软组织样本从样品容器中取出,并用纤维素薄纸去除多余的染色剂。将其放入乙醇气相上方的锥形容器中,以便储存和进一步使用。

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最后更新:1 八月 2026