石蜡包埋组织切片的 H&E 染色:一种使用苏木精和伊红染料组合可视化肝组织切片的差异染色技术

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通过取含有石蜡包埋组织切片的载玻片开始苏木精和曙红染色。将载玻片浸入含有二甲苯的脱蜡溶液中 - 二甲苯是一种有机溶剂,可溶解组织周围的石蜡层,使其在后续步骤中容易沾染。

用无水酒精处理组织切片以去除二甲苯。将组织浸入降低浓度的酒精中。此步骤通过用水代替酒精来使组织重新水化,以更好地与水溶性染料相容。

用碱性苏木精染色组织,苏木精以其氧化形式与媒染剂 - 一种金属阳离子结合。这种复合物静电与基因组中的核酸结合,将细胞核染成紫色。

染色切片浸入酸性分化溶液中,以去除细胞质中多余的苏木精,使保留染料的细胞核看起来明显。用碱性发蓝剂处理组织以中和游离酸。这会将紫色染料颜色退回到蓝色,从而增强核细节。

载玻片浸入酸性伊红溶液中,将细胞质中的基本蛋白质成分和结缔组织纤维染成红色至粉红色。用酒精处理组织以消除多余的曙红。使用增加浓度的乙醇使组织脱水。将载玻片浸入二甲苯中以清除任何残留的试剂。

成像

后,组织切片中的细胞显示出透明的蓝色细胞核和粉红色的细胞质区域。

通过将

载玻片浸入 100% 二甲苯中两次,每次 15 分钟来脱蜡。然后,通过乙醇梯度使载玻片再水化。对于每种溶液,浸泡 8 到 10 次,每次浸泡两秒钟,直到液体干净地从载玻片上流出。将载玻片放入 100% 过滤的 Harris 苏木精中四分钟。

四分钟后,快速将它们转移回装有去离子水的容器中。将去离子水流入容器的后角,距离这些部分最远。定期清空容器,直到水不再呈紫色。

使用鹅颈灯在解剖显微镜上快速检查苏木精强度。如果需要进一步染色,将载玻片放回100%苏木精中一分钟。

获得

所需的苏木精染色后,将载玻片浸入0.05%盐酸中两次,然后立即将它们转移回装有干净去离子水的容器中。清空容器并重新装满水两次。

载玻片转移到两个装有 95% 乙醇的容器中,每个容器 30 秒。将载玻片放入伊红Y福禄辛-B溶液中两分钟。

两分钟后,将载玻片转移回之前的95%乙醇容器中,然后在解剖显微镜下检查颜色的强度。如果染色不充分,则返回伊红溶液中30秒。根据需要重复。

获得

所需强度的染色后,将载玻片转移到100%异丙醇中15秒。更换为新鲜的 100% 异丙醇,然后将载玻片放回异丙醇中再放置 15 秒。重复此过程,总共洗涤六次异丙醇。

100%二甲苯中浸泡三分钟后,取出一张载玻片,加入足够的封固剂覆盖切片,然后将载玻片浸入100%二甲苯中。

载玻片上贴上盖玻片,并在纸巾上吸干多余的封固剂,直到只看到一条细线。然后,将纸巾浸入二甲苯中并擦拭载玻片背面以去除任何滴落的培养基。

载玻片平放在坚固但可移动的表面上,例如一块纸板,让二甲苯在引擎盖中蒸发 10 分钟。将载玻片在室温下放置过夜,让封片介质在成像前硬化。

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Last updated: 18 July 2026