石蜡包埋组织切片的苏木精-伊红染色：利用苏木精与伊红染料组合对肝组织切片进行可视化的差异染色技术

开始进行苏木精和伊红染色时，取一张载有石蜡包埋组织切片的玻片。将玻片浸入含有二甲苯的脱蜡溶液中——二甲苯是一种有机溶剂，可溶解组织周围的石蜡层，从而使组织在后续步骤中易于接触染料。

用纯酒精处理组织切片以去除二甲苯。将组织浸入浓度递减的酒精中。此步骤通过用水替代酒精使组织重新水化，以提高与水溶性染料的相容性。

使用碱性苏木精对组织进行染色，苏木精在其氧化形式下可与媒染剂（一种金属阳离子）结合。该复合物通过静电作用与基因组中的核酸结合，使细胞核呈现紫色。

将染色切片浸入酸性分化液中，以去除细胞质中过量的苏木精，使保留染料的细胞核清晰可见。用碱性蓝化剂处理组织，以中和游离酸。此步骤可使紫色染料转变为蓝色，从而增强细胞核的细节。

将切片浸入酸性伊红溶液中，使细胞质中的碱性蛋白质成分和结缔组织纤维染成不同程度的红色至粉红色。用酒精处理组织以去除多余的伊红。使用浓度递增的乙醇对组织进行脱水。将切片浸入二甲苯中以清除残留的试剂。

成像后，组织切片中的细胞显示出清晰的蓝色细胞核和粉红色的细胞质区域。

将切片浸入100%二甲苯中脱蜡两次，每次15分钟。然后通过梯度乙醇进行水化。每种溶液中浸入8至10次，每次2秒，直至液体能从切片上干净流下。将切片置于100%过滤的哈里斯苏木精染液中4分钟。

四分钟后，迅速将它们转移回去离子水容器中。将去离子水注入容器中距离切片最远的后方角落。定期排空容器，直至水不再呈现紫色为止。

使用鹅颈灯在解剖显微镜下快速检查苏木精染色强度。如果需要进一步染色，将玻片重新放入100%苏木精中染色一分钟。

当获得理想的苏木精染色后，将玻片浸入0.05%盐酸中两次，然后立即转移回盛有洁净去离子水的容器中。将容器中的水倒空并重新加水两次。

将切片转移至两个盛有95%乙醇的容器中，每个容器中浸泡30秒。随后将切片放入伊红Y-品红B溶液中染色2分钟。

两分钟后，将切片转移回先前的95%乙醇容器中，然后在解剖显微镜下检查染色颜色的强度。如果染色不足，返回伊红溶液中复染30秒。根据需要重复此步骤。

当达到理想的染色强度后，将玻片转移至100%异丙醇中浸泡15秒。弃去异丙醇，加入新鲜的100%异丙醇，再次将玻片放入其中浸泡15秒。重复此过程，共进行六次异丙醇洗涤。

将一张切片浸入100%二甲苯中三分钟后，取出切片，加入足量封片介质以覆盖组织部分，然后将切片再次浸入100%二甲苯中。

将盖玻片盖在载玻片上，用纸巾吸去多余的封片介质，直至仅剩一条细线。然后将纸巾浸入二甲苯中，擦拭载玻片背面，去除滴出的介质。

将切片平放在坚固且可移动的表面（如一张硬纸板）上，置于通风橱中使二甲苯挥发10分钟。将切片在室温下放置过夜，待封片介质完全硬化后再进行成像。