甲苯胺蓝染色法用于周围神经切片：一种染色有髓神经纤维以观察周围神经结构的技术

周围神经由轴突组成，轴突周围被施万细胞包裹，施万细胞以多层富含脂质的细胞膜缠绕轴突，形成髓鞘。

为了观察周围神经，首先准备一张载玻片，其上含有经固定、树脂包埋并用四氧化锇处理的大鼠周围神经横切面。树脂包埋切片有助于保持组织形态。

四氧化锇处理会导致在组织部位的髓鞘脂质层中沉积金属锇。

将碱性亚甲蓝溶液滴加到组织切片上。在适当温度下将玻片干燥。碱性条件和加热有助于亚甲蓝穿透树脂进入组织切片。

甲苯胺蓝作为一种阳离子染料，可与施万细胞细胞核中DNA上的带负电荷的磷酸基团结合，同时插入DNA碱基对之间。此外，该染料还可与髓鞘外细胞质中的RNA结合。

在染色的神经切片上添加封片液，然后盖上盖玻片，以制备用于成像的组织样本。在光学显微镜下，经过锇处理后，髓鞘层呈黑色，并显示出清晰的有髓神经纤维结构，而轴突则未被染色。 

由于染料的异染性，施万细胞的细胞核和细胞质呈现不同深浅的蓝色，有助于观察周围神经中轴突的形态及髓鞘化程度。

为了染色神经切片，使用塑料移液管或微量移液器在神经切片上滴加一滴甲苯胺蓝溶液。20 至 30 秒后，将载玻片轻轻浸入去离子水瓶中，冲洗掉多余的甲苯胺蓝溶液，重复 3 至 4 次，直至切片清晰。

将载玻片在60摄氏度下干燥至少15分钟，或在室温下过夜干燥。干燥后，加入常规封片剂，并用盖玻片覆盖组织切片。最后，在光学显微镜下观察封片后的切片。建议使用100倍油镜以获取详细图像，用于计算g比值（g-ratio）。