组织切片的甲酚紫染色:一种在冷冻小鼠胚胎切片中可视化软骨和骨骼的染色程序

0 次观看3:32 分钟 • July 8th, 2025

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要可视化组织切片中的软骨和骨骼区域,请从载玻片开始,载玻片携带感兴趣的薄冷冻小鼠胚胎组织切片。

短暂解冻冷冻切片并将其浸入合适的乙醇浓度中以除去冷冻包埋介质。去除步骤有助于防止培养基松动,否则可能会影响染色过程中的组织可视化。此外,乙醇可以固定组织,保持组织形态和完整性。

接下来,将甲酚紫溶液移液到组织上。甲酚紫是一种带正电的碱性染料,与软骨组织基质中的聚阴离子部分(例如蛋白聚糖)结合。然而,在骨骼等矿化组织中,它与带负电荷的基团(例如骨基质中的磷酸基团)发生反应。

作为一种异色染料,甲酚紫根据其与天然染料内不同化学成分的相互作用,将组织的不同区域染色成与天然染料不同的颜色。

现在,以合适的乙醇浓度清洗组织以去除多余的污渍。将组织浸入增加的乙醇浓度中,以替代组织中的水分,使组织脱水。用二甲苯洗涤组织以置换乙醇,使组织透明以供显微镜检查。

在光学显微镜下,软骨组织呈洋红色,而骨组织呈棕色,有利于它们彼此之间以及周围组织的区分。

准备三个标记的 50 毫升离心管。向每个试管中加入 45 毫升 80% 乙醇。将三根管子放在冰上。将装有 45 毫升 95% 乙醇的管子和装有 100% 乙醇的管子放在冰上。接下来,在室温下将 45 毫升二甲苯加入 50 毫升离心管中。

PEN膜载玻片放在戴手套的手上短暂解冻,并在每个含有80%乙醇的管中搅拌清洗两次,每次30秒,以去除最佳切割温度化合物。然后,将载玻片放在一张铝箔上。将 0.8 毫升 0.1% 甲酚紫液化液到 50% 乙醇中,移液到载玻片上,染色 30 秒。

含有 80% 乙醇的第三个管中洗涤载玻片 30 秒。通过载玻片通过含有 95% 乙醇的管 30 秒,将含有 100% 乙醇的管子 30 秒,最后通过含有二甲苯的管 30 秒来脱水。之后,将载玻片放在精密的任务擦拭器上 5 分钟,让二甲苯排出并让切片干燥。

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最后更新:1 八月 2026