幼虫 Drosophila 油细胞中的脂滴染色：利用基于BODIPY的染料在正常与应激条件下评估脂滴积累的技术

Drosophila 幼虫的脂细胞是特化的细胞，以离散簇的形式附着在侧表皮——即皮肤的浅层——的基底表面。这些脂细胞主要参与脂质代谢。

在饥饿状态下，这些脂肪细胞会积累过多的脂滴。每个脂滴由中性脂质（如甘油三酯和胆固醇酯）组成的疏水核心构成，外周包裹着一层磷脂单分子层。

为了观察脂滴，取一段解剖得到的附带有脂肪体细胞（oenocytes）的 Drosophila 幼虫表皮组织。用含有多聚甲醛的固定液处理样本，以交联蛋白酶等细胞蛋白，保持脂肪体细胞的结构完整性。移除固定液后，在避光条件下用荧光BODIPY染料进行孵育，防止光漂白。

孵育过程中，非极性染料会扩散穿过oenocyte细胞膜，并穿过包围脂滴的单层结构。染料分子的疏水性使其能够进入脂滴的非极性核心，从而与中性脂质结合。 

将样本置于载玻片上，使卵细胞紧贴显微镜载玻片以获得清晰的观察效果。用盖玻片封片后，在荧光显微镜下观察。

当使用波长为493纳米的蓝光激发时，该染料在503纳米处发射绿色荧光。绿色荧光斑点证实了脂滴的存在。

进行脂滴染色时，将解剖得到的表皮组织置于固定缓冲液中，在室温下旋转孵育30分钟，随后在1毫升磷酸盐缓冲液（PBS）中快速重悬。然后，用1毫升PBS洗涤样品三次，每次5分钟，以去除残留的固定剂。

最后一次洗涤后，将表皮样品置于旋转器上，加入适量的亲脂性探针，在室温下孵育30分钟。孵育期间，用铝箔包裹样品管以避光，并用1毫升PBS溶液洗涤样品三次，每次洗涤10分钟。

为了观察脂细胞，将每份表皮样品转移至洁净显微镜载玻片上6微升的封片介质中。调整组织的方向，使含有脂细胞的内表面紧贴载玻片底部。轻轻盖上盖玻片，并用透明指甲油密封边缘。待指甲油完全干燥后，使用共聚焦显微镜在63倍放大倍数下，根据适当的激发和发射波长对样品进行成像。