果蝇幼虫油滴红细胞的脂滴染色:一种使用 BODIPY 基染料评估正常和应激条件下脂滴积累的技术

果蝇幼虫鸟细胞是专门的细胞，以离散簇的形式附着在外表皮的基底表面 - 皮肤的表层。这些鸟细胞主要参与脂质代谢。

饥饿期间，这些鸟细胞会积累多余的脂滴。每个液滴由中性脂质（例如甘油三酯）和胆固醇酯的疏水核心组成，

要可视化脂滴，请解剖果蝇幼虫表皮并附有卵细胞。用含有多聚甲醛的固定缓冲液处理，以交联蛋白酶等细胞蛋白质并保持蛋氨酸细胞的结构完整性。取出固定缓冲液。在黑暗中与基于 BODIPY 的荧光染料一起孵育以避免光漂白。

孵育过程中，非极性染料扩散穿过蛋细胞的细胞膜并穿过脂滴周围的单层。染料分子的疏水性允许它们进入脂滴的非极性核心以结合中性脂质。

标本安装在载玻片上，使蛋细胞接触显微载玻片以获得清晰的可视化。使用盖玻片密封样品并在荧光显微镜下观察。

在被波长为 4 93 纳米的蓝光激发后，染料会发出 503 纳米的绿色荧光。绿色荧光斑确认脂滴的存在。

对于脂滴染色，将解剖的表皮在固定缓冲液中孵育，在室温下在旋转器上孵育30分钟，然后在1毫升PBS中快速重悬。然后，每次洗涤用 1 毫升 PBS 洗涤样品，每次 5 分钟洗涤，以去除任何残留的固定剂。

最后一次洗涤后，将表皮样品与适当的亲脂性探针在室温下在旋转器上孵育30分钟。在孵育过程中，用箔纸包裹样品管以保护组织免受光照，并在 1 毫升 PBS 中洗涤样品 3 次，每次洗涤 10 分钟。

要对卵细胞进行成像，请将每个表皮样品转移到干净的显微镜载玻片上的 6 微升封固剂中。调整组织的方向，使含有蛋细胞的内表面接触载玻片的底部。轻轻地将盖玻片放在表皮上，并用透明指甲油密封边缘。抛光剂干燥后，在共聚焦显微镜上以 63 倍放大倍率对样品进行成像，并具有适当的激发和发射波长。