大鼠脑组织切片的TTC染色：一种用于区分缺血-再灌注损伤后组织切片中存活与坏死组织的染色方法 TTC染色，大鼠脑组织，缺血-再灌注损伤，组织切片，坏死组织，存活组织

在脑缺血期间，脑部血流受阻导致氧气和营养物质供应减少，从而引起脑组织损伤。短暂缺血后，随着脑血流恢复，氧气供应增加引发再灌注，导致活性氧物质过度产生，进而造成氧化性组织损伤，称为缺血-再灌注损伤。

为了评估大鼠模型中缺血-再灌注损伤后的脑损伤情况，首先获取大鼠脑组织。用预冷的缓冲液冲洗以去除碎片和血液。将脑组织切片以获得所需厚度的冠状切面。小心地将切片转移至含有缓冲液的托盘中，确保前部朝上，以便后续染色。

在脑切片上加入温热的氯化三苯基四氮唑（TTC）溶液，TTC 是一种水溶性氧化还原染料。在避光条件下孵育，因为 TTC 对光敏感。TTC 可进入组织切片中的细胞内。

在活细胞中，有活性的线粒体琥珀酸脱氢酶在辅因子存在下，可将无色的氧化型TTC还原为不溶于水的红色甲臜，使活细胞呈现深红色。然而，坏死细胞缺乏脱氢酶活性，因此TTC保持氧化状态，使细胞染成白色。

孵育后，将脑片转移至成像托盘中。在矢状面上分离半球。对脑片进行成像。

健康组织呈红色，而受损组织呈白色，可区分坏死组织与存活组织，从而评估组织损伤程度。

从颅骨中取出包括脑干在内的脑组织后，将脑组织腹侧朝上置于脑切片矩阵中。根据动物体重选择合适尺寸的不锈钢脑切片矩阵。使用刀片固定脑组织的前部和后部，然后将刀片部分插入第一片与最后一片之间的槽道中。

当所有刀片均已插入并平行排列后，用手掌同时下压所有刀片，将脑组织切成 2 毫米厚的冠状切片。然后用两根手指牢固地从两侧握住刀片，连同已切好的脑组织一起从切片模具中取出。将脑切片逐一放置在托盘中，确保每一片的前表面始终朝上。

接下来，将温热的1%氯化三苯基四氮唑溶液和PBS加入脑切片中，于37摄氏度避光孵育8分钟。孵育结束后，将脑切片转移至蓝色塑料托盘中以采集图像。按照从前额叶到尾端的顺序排列脑切片，并使用解剖刀沿矢状面分离半球。