大鼠脑组织切片的 TTC 染色:一种区分缺血再灌注损伤后组织切片中活组织和坏死组织的染色程序

脑缺血期间，流向大脑的血流受损会减少组织的氧气和营养供应，从而导致脑损伤。短暂缺血后，随着流向大脑的血流恢复，氧气供应增加的再灌注会导致反应性离子物质过度产生，从而导致氧化组织损伤，称为缺血再灌注损伤。

为了评估大鼠模型中缺血再灌注损伤后的脑损伤，首先，收获大鼠大脑。在冷冻缓冲液中冲洗以去除碎屑和血液。切片大脑以获得所需厚度的冠状切片。小心地将切片转移到含有缓冲液的托盘中 - 前表面朝上 - 以便随后染色。

脑切片上加入温热的三苯基四唑氯化物 TTC（一种水溶性氧化还原染料）溶液。在黑暗条件下孵育，因为TTC对光敏感。TTC 进入组织切片内的细胞。

在活细胞中，活性线粒体琥珀酸脱氢酶在辅因子存在下将氧化时无色的TTC还原为不溶于水的红色福臜，将活细胞染成深红色。然而，坏死细胞缺乏脱氢酶活性;因此，TTC 保持氧化形式，将细胞染成白色。

孵育后，将脑切片转移到成像托盘中。在矢状面中分离半球。对大脑切片进行成像。

健康组织呈红色，而受损组织呈白色，将坏死组织与活组织区分开来，并能够估计组织损伤的程度。

从头骨上取出大脑（包括脑干）后，将大脑腹侧朝上放入大脑基质中。根据动物的体重，选择正确尺寸的大脑不锈钢基质。使用刀片，限制大脑的额部和尾部。然后，将刀片部分放入第一个和最后一个刀片之间的通道中。

当所有刀片插入并平行排列时，用手掌同时向下压所有刀片，将大脑切成2毫米的冠状切片。然后，用两根手指沿着两侧牢牢抓住刀片，将它们与切片的大脑一起从矩阵中取出。将脑切片一个接一个地排列在托盘中，确保每个切片的前表面始终朝上。

接下来，将温热的1%三苯基四唑氯化物溶液和PBS倒在脑切片上，并在黑暗中在37摄氏度下孵育8分钟。孵育后，将脑切片转移到蓝色塑料托盘中以捕获图像。将脑切片从额叶到尾部按顺序排列，并用手术刀将矢状面的半球分开。