聚丙烯酰胺凝胶中硫酸化糖胺聚糖的银染：一种用于可视化硫酸化糖胺聚糖的染色方法

硫酸化糖胺聚糖（GAGs）是一类长链、带负电荷的线性多糖，具有在特定位置发生硫酸化的重复二糖单元链，其链长各异。

为了在电泳后通过聚丙烯酰胺凝胶可视化具有不同链长的目标硫酸化糖胺聚糖（GAG），请小心地将凝胶从其夹心中取出。用去离子水冲洗，去除可能干扰染色的附着凝胶碎片。

用酸性阿尔新蓝溶液处理。在酸性条件下，阿尔新蓝（一种中心含有铜原子的多价阳离子染料）通过离子相互作用特异性地与带负电荷的硫酸化糖胺聚糖（GAGs）结合，形成深蓝色、不溶于水的复合物。

用去离子水和甲醇洗涤凝胶，去除任何残留染料。将凝胶与碱性硝酸银溶液孵育。在碱性条件下，结合了阿利新蓝的硫酸化糖胺聚糖可为带正电荷的银离子提供结合位点，形成复合物。

将凝胶置于含有甲醛和柠檬酸的显影液中处理。柠檬酸可降低局部pH值，从而优化甲醛的活性；甲醛将银离子还原为不溶性的金属银，沉积于硫酸化糖胺聚糖（GAG）片段内，进而放大阿利新蓝信号。

加入终止液以降低 pH 值，防止银离子进一步还原，从而将背景染色降至最低。现在对凝胶进行成像。

经阿利新蓝-银染色的硫酸化糖胺聚糖片段条带呈深棕色或黑色，可实现高灵敏度的可视化，并用于确定分离得到的糖胺聚糖聚合物链的长度。

运行结束后，拆卸胶盒，小心将凝胶取出并放入盛有去离子过滤水的大而洁净的容器中。随后倒去水，并将凝胶置于阿尔新蓝染色液中染色五分钟。弃去阿尔新蓝染色液，用去离子过滤水快速漂洗两到三次，直至大部分阿尔新蓝染色液被去除。

在洁净的新容器中，用硝酸银染色液对凝胶染色30分钟。随后用去离子过滤水漂洗2至3次，每次30分钟，以彻底去除硝酸银染色液。弃去水溶液，加入显色液。

仔细观察凝胶中条带的出现情况。根据染色质量和上样量的不同，显色过程可能需要数秒至数分钟。一旦观察到理想的条带，应立即弃去显色液，并用终止液短暂洗涤凝胶。