使用阿尔新蓝染色法可视化蛋白聚糖:一种检测间充质干细胞分化软骨细胞培养中蛋白聚糖的技术 体外

0 次观看2:42 分钟 • July 8th, 2025

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蛋白聚糖由一个核心蛋白通过共价键连接硫酸化糖胺聚糖链组成。

为了可视化蛋白聚糖,首先使用基于胶原蛋白的支架——即多孔聚合物基质——并将间充质干细胞(MSC)悬液接种于其上。这为MSC提供了结构支持,使其能够在支架表面以及支架内部空隙中生长。

将构建物置于含有转化生长因子的软骨诱导分化培养基中,以促进间充质干细胞向成熟软骨细胞(软骨样细胞)转化。成熟的软骨细胞会分泌蛋白聚糖,这些蛋白聚糖与支架中的胶原蛋白形成网络结构。

取一段由软骨细胞负载的构建物制备的切片。加入含有盐酸胍的酸性阿尔新蓝染色液并进行孵育。在孵育过程中,染色液中的盐酸胍可解离蛋白聚糖聚集体,从而实现更佳的染色效果。

随后,蛋白聚糖中带负电荷的硫酸化糖胺聚糖与含铜的带正电荷的阿利新蓝染料分子结合,形成蓝色沉淀。

接着,将玻片浸入含有氯化镁的脱染液中。镁离子会与带正电荷的染料分子竞争糖胺聚糖上的结合位点,从而防止过度染色。

对切片进行成像。蓝色着色表明样品中存在蛋白聚糖。

为了从由冻干 I 型胶原蛋白制成的海绵状医疗器械中进行软骨诱导分化,将该材料切成每边 3 毫米的立方体。以 4 × 106 个细胞/毫升的浓度将间充质干细胞接种于立方体表面。

在室温下孵育30分钟使细胞贴附于立方体后,将MSC-胶原复合物置于文本方案中列出的软骨诱导培养基中培养。向切片中加入0.4% 阿利新蓝溶液,并在4摄氏度下孵育过夜。

次日,使用 40% DMSO 和 0.05 摩尔的氯化镁对细胞进行洗涤,持续 30 分钟,然后使用核快红对细胞进行复染。

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最后更新:22 八月 2026