0 次观看 • 4:14 分钟 • July 8th, 2025
应激激活的心脏成纤维细胞在损伤区域沉积过量胶原蛋白，这种状况称为纤维化，会损害心脏功能。
为了观察纤维化的程度，首先对石蜡包埋的心脏组织块进行切片。将切片置于载玻片上。加热载玻片以熔化石蜡，使组织切片贴附牢固。
将切片浸入二甲苯中以脱去组织中的石蜡。用梯度递减的酒精处理切片，使其重新水化，并有助于后续水溶性染色剂成分的结合。
将切片置于酸性固定剂中孵育，该固定剂可交联蛋白质，从而稳定组织结构。用清水冲洗以去除残留的固定剂。
将玻片浸入苏木精溶液中。阳离子染料与带负电荷的DNA结合，使细胞核染成蓝色。用清水冲洗以去除多余的染料。
将切片置于酸性品红-丽春红（acid Fuchsin-Ponceau）中孵育，该试剂是一种小分子阴离子染料，可与带正电荷的胞质蛋白和胶原蛋白结合，使其染成红色。随后用稀释的乙酸处理，以去除多余的染料。
将切片浸入磷钼酸-橙G溶液中。橙G是一种小分子染料，可将红细胞染成橙红色。磷钼酸是一种大分子酸，能将小分子染料从胶原蛋白中排出，使其呈无色。
将切片置于浅绿色染料中孵育，该染料分子可结合胶原纤维，使其呈现绿色。在显微镜下，纤维化区域呈绿色，表明存在过量的胶原沉积。
在此步骤中，使用手动切片机从石蜡包埋块制备五微米厚的组织切片。随后，对每只大鼠的每份心脏切片各染色一张载玻片，采用马松-戈德纳三色染色法。对于石蜡切片，先在60摄氏度的烘箱中将组织融化。在通风橱内，用二甲苯脱蜡两次，每次10分钟。
然后，依次在100%乙醇、95%乙醇、70%乙醇中各重水化3分钟，最后在蒸馏水中浸泡3分钟。对于脱蜡的切片以及冷冻切片，用Bouin溶液固定过夜。次日早晨，用流动的自来水冲洗10至15分钟，再用蒸馏水冲洗一次。
使用Bouin液固定是确保获得理想Goldner染色结果的最重要步骤。
将切片置于 Mayer 苏木精染液中孵育 3 分钟。3 分钟后取出切片，放入蒸馏水中浸泡 5 分钟。随后将切片置于丽春红-酸性品红染液中孵育 5 分钟，再用 1% 乙酸溶液冲洗 1 分钟。
接着，将切片置于磷钼酸橙G中孵育1分钟，然后用1%乙酸冲洗1分钟。再将切片置于亮绿染液中孵育10分钟，随后用1%乙酸冲洗1分钟。最后，依次用70%乙醇脱水30秒、95%乙醇脱水30秒、100%乙醇脱水5分钟。在组织切片上滴加一滴树脂封片剂，盖上盖玻片，然后放置晾干。