偏振光下苦味酸-天狼星红染色：一种利用明场显微镜检测心脏组织切片中纤维化的技术

纤维化是指在受损组织的细胞外基质中纤维状胶原蛋白的沉积增加。从结构上看，它由三股螺旋胶原多肽链组成。

使用苦味酸-天狼星红染料对胶原进行染色时，取经多聚甲醛固定、石蜡包埋的心脏组织切片。将组织切片浸入二甲苯（一种有机溶剂）中，以溶解周围的石蜡。

依次使用浓度递减的酒精处理脱蜡组织，以取代二甲苯。将组织浸入水中使其重新水化，以便在后续步骤中更好地观察染色效果。

将组织浸入含 Sirius red（一种阴离子偶氮染料）和苦味酸的苦味品红红溶液中。

刚果红含有酸性磺酸基团，可与胶原蛋白中的赖氨酸、羟基赖氨酸和精氨酸所含的碱性氨基相互作用。苦味酸有助于维持酸性 pH 环境，促进染料分子以平行方向与胶原蛋白结合。

将玻片浸入酸性脱色液中冲洗，以去除多余的染料。在玻片上滴加一滴封片剂，然后在明场显微镜下观察。

与非纤维化的黄色区域相比，含胶原蛋白的纤维化区域呈亮红色。

固定心脏组织后，将其置于组织切片装置上，切成2毫米厚的切片，并将切片放入包埋盒中。

根据文本方案进行石蜡包埋和进一步切片后，将切片放入二甲苯中浸泡30分钟以脱蜡。随后依次通过梯度稀释的酒精溶液进行水化，最后用蒸馏水冲洗。

接下来，使用足量的苦味酸-天狼星红溶液完全覆盖组织切片，孵育1小时。然后用0.5%乙酸溶液冲洗载玻片两次，并用无水乙醇冲洗样本两次。

将样品风干后，用合成树脂封片并加盖盖玻片。随后在显微镜下使用可见光，于200倍放大倍数下对切片进行成像。