苏丹IV染色：一种用于染色收获的小鼠主动脉弓中富含脂质的动脉粥样硬化斑块的方法 关键词：苏丹IV染色，动脉粥样硬化斑块，小鼠主动脉弓，脂质染色，组织学染色

动脉粥样硬化是由于脂蛋白在动脉内膜中积聚，导致斑块形成、动脉壁增厚和狭窄，以及血流减少所引起的。

斑块由纤维帽构成，其中含有平滑肌细胞和细胞外基质，包裹着一个核心，该核心由低密度脂蛋白（LDLs）——一种具有胆固醇酯和甘油三酯疏水核心、外周包绕磷脂层的球形颗粒——以及炎性细胞组成。

为了可视化富含脂质的动脉粥样硬化斑块，获取新鲜摘取的小鼠主动脉弓，将其转移至定制的深色背景平台，以在大范围成像过程中提高对比度。加入缓冲液以防止组织脱水。

去除主动脉弓周围血管外脂肪组织，以防止非特异性背景染色。沿管腔纵向切开主动脉及其分支，以暴露内膜表面的动脉粥样硬化斑块沉积区域。

将打开的主动脉弓固定在平台上，并在乙醇中孵育。乙醇可置换组织中的水分，使蛋白质失活，从而保存组织结构。 

用溶于有机溶剂的苏丹IV染色剂处理。在斑块中，苏丹IV是一种脂溶性偶氮染料，对脂蛋白中的甘油三酯和胆固醇酯具有高亲和力，可从有机溶剂相转移并结合至低密度脂蛋白（LDL）的疏水性脂质核心，形成稳定的复合物。使用乙醇洗去多余的染料。

在体视显微镜下，染色后富含脂质的动脉粥样硬化斑块呈橙红色，而非斑块区域则呈淡色。

为进行内面分析而制备固定床时，将一段石蜡膜折叠8次，形成一个平坦的25 × 25毫米表面，并用黑色电工绝缘胶带包裹该膜，以为主动脉提供深色背景。

在固定板的背面贴上标签，并使用铅笔写下小鼠的编号。将主动脉弓转移至固定板上，并向组织滴加一滴 PBS。在体视显微镜下，清除主动脉上残留的外膜周围脂肪组织，使用 Vannas 剪刀和 Dumont 镊子轻轻剥离所有周围的脂肪组织，注意不要触碰或损伤主动脉。

接着，将Vannas剪刀插入主动脉管腔以暴露内膜表面。从升主动脉弓的外侧曲面开始，沿远端方向剪开，并继续切开各分支，包括头臂动脉，但保留胸降主动脉的背侧部分。

为了显示内膜表面，沿小弯侧剪开并展开主动脉。使用微型Castroviejo持针器，用微型昆虫针的钝端将打开的主动脉弓固定在固定板上，注意不要拉伸组织，轻轻将针弯离标本，以确保组织固定到位。随后，将固定好的主动脉弓朝下存放于盛有PBS的培养皿中，并置于4摄氏度环境中保存。

进行苏丹IV染色时，先将标本置于盛有70%乙醇的培养皿中，弓面朝下浸洗5分钟，然后将标本转移至苏丹IV工作液中染色7分钟。

孵育结束后，用80%乙醇进行两次、每次3分钟的漂洗，以去除正常内膜表面的染色，随后用PBS进行最终漂洗，再将组织放回原来的培养皿中。然后，在体视显微镜下连接数字相机，以10倍放大倍数获取微图像，拍摄浸没在PBS中的固定主动脉弓的图像，并使用小型金属重物将固定基底压在培养皿底部。