基于薄层色谱法的分枝杆菌酸变体分离:一种基于极性分离分枝杆菌细胞壁脂质的方法

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分枝杆菌细胞壁含有不同的霉菌酸变体--具有保守α链的长链脂肪酸。它们的β链存在结构差异,导致不同麦芽酸的极性发生变化。

要使用薄层色谱法或TLC(一种液相色谱技术)分离变体,请将分枝杆菌细胞壁脂质放入所需的有机溶剂中。在预涂有一层薄薄的吸附材料的 TLC 板的底部附近发现脂质,该材料充当固定相。

板放入装有有机溶剂(流动相)的罐中,确保液位低于样品点,以防止麦司柯酸过早扩散。

运行过程中,流动相通过毛细管作用通过板上吸附剂层的微小孔上升。最终,麦克酸溶解在溶剂中并向上移动。

更极性的麦克酸变体通过分子间力极性固定相瞬时吸附,阻碍它们向上运动。极性较小的麦克林酸保留在非极性流动相中并进一步迁移。

迁移的差异导致麦芽酸的变体分离成离散的条带。

完成后,用磷钼酸染色剂喷洒干燥的板。加热板以减少脂质存在下的污渍,使条带呈深绿色。

要通过 TLC 分析样品,请用一张滤纸盖住 TLC 室的一壁。在腔室角上添加凡士林以密封腔室。将溶剂混合物倒出滤纸上,并将剩余体积的溶剂添加到 TLC 室底部。关闭 TLC 室至少 20 分钟以使其饱和

同时,将玻璃管中的脂质溶解在200至1000微升氯仿中,并使用毛细管玻璃管将10微升脂质-氯仿悬浮液直接涂在TLC板上。让样品干燥五分钟后,将板插入饱和的TLC室中,让流动相流过TLC。

当溶剂达到距板上端 1 厘米时,将板置于层流通量下,直到二氧化硅完全干燥。然后,用15至20毫升10%羟基磷酸钼乙醇水合物喷洒干燥的板,直至板呈亮黄色,并在120摄氏度下加热板2至5分钟。

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Last updated: 18 July 2026