0 次观看 • 3:46 分钟 • July 8th, 2025
抗体-药物偶联物（ADC）是通过合适的连接子将靶向特异性的单克隆抗体与细胞毒性药物连接而成。这种随机偶联过程会产生携带不同数量药物分子的ADC。
抗体药物偶联物（ADC）的特征由其药物-抗体比率（DAR）决定，该比率直接影响其治疗效果。ADC的疏水性使其成为疏水相互作用液相色谱（HIC）表征的合适候选对象。
首先，组装一个含有基于琼脂糖基质的固定相的色谱柱。该基质与丁基基团交联——即疏水性烷基官能团。 用高盐结合缓冲液平衡色谱柱，随后将ADC溶液上样至柱中。
缓冲液中的盐离子会置换抗体药物偶联物（ADCs）周围的水分子，暴露出其疏水区域，从而促使ADCs与丁基配体结合。 通过 疏水相互作用。连接药物分子数量更多的抗体药物偶联物（ADCs）与色谱柱的相互作用更强。
缓慢用低盐浓度的洗脱缓冲液替换高盐缓冲液。这种逐步降低盐浓度的过程称为梯度洗脱。
盐离子的减少使水分子能够重新包围抗体药物偶联物（ADCs），从而破坏其与配体的相互作用。结合药物分子数最少的ADC首先被洗脱，随后是药物抗体比（DAR）更高的组分。
监测洗脱过程，以根据抗体药物偶联物（ADC）的药物-抗体比率（DAR）对其进行表征。
为分析偶联物，先用100%高盐缓冲液平衡HPLC-HIC色谱柱5分钟。然后，在样品瓶中将15微升浓度为1 mg/mL的与MMAE连接的trastuzumab溶液与15微升2X高盐缓冲液混合。将混合液注入HPLC色谱柱中。以1 mL/min的等度流速，用100%高盐缓冲液洗脱1分钟。
接着用低盐缓冲液对高盐缓冲液进行15分钟的梯度洗脱，比例从100%降至0%。在280纳米处监测洗脱过程。对色谱图中保留时间分别为7.5、9.2和11.5分钟的峰进行积分，这三个峰分别对应未结合毒素、结合一个毒素和结合两个毒素的trastuzumab。
现在，通过将9.2分钟处（权重为1）和10.5分钟处（权重为2）的峰面积相加，再除以三个峰的总面积，计算DAR值。