荧光检测尺寸排阻色谱法：一种用于鉴定去垢剂溶解后荧光标记膜蛋白完整性的技术

细菌的内在膜蛋白锚定于脂双层膜上，介导分子跨膜运输及信号转导。在结构研究中，特定的内在膜重组蛋白会与绿色荧光蛋白（GFP）融合并过表达。

为了评估去垢剂溶解后重组膜蛋白的稳定性，需获取含有GFP标签的整合膜蛋白的细菌膜组分。加入非离子型去垢剂。当去垢剂浓度超过临界浓度时，会形成胶束。

胶束可与脂质膜及膜蛋白相互作用，使膜溶解并形成蛋白-去垢剂复合物。此外，膜蛋白的疏水性跨膜区域可能仍暴露在外，导致蛋白聚集。同时，由于膜蛋白降解，还可能产生游离的绿色荧光蛋白（GFP）。

离心混合物。收集含有去污剂溶解组分的上清液。

组装一个连接荧光检测器的尺寸排阻色谱柱。该色谱柱的基质由琼脂糖微珠组成，其孔径大小定义了较宽的分级范围。 

使用含有去垢剂的缓冲液平衡层析柱，以尽量减少非特异性相互作用并维持蛋白质的溶解状态。

将溶解的膜组分上样至层析柱中。蛋白质聚集体无法进入最大的孔隙，只能通过凝胶珠之间的颗粒间隙移动，因此最先洗脱出来。较小的蛋白-去污剂复合物可进入凝胶珠的部分孔隙，经过更长的路径，随后洗脱。游离的GFP可进入所有凝胶珠的孔隙，路径最长，最后洗脱。荧光检测器分析洗脱的各组分，检测GFP发射的荧光信号。

蛋白-去垢剂复合物的对称荧光峰，且聚集体和游离GFP极少，表明该去垢剂适用于膜蛋白的增溶。

对于荧光检测的尺寸排阻色谱或FSEC分析，接下来使用运行流速为每分钟0.3毫升的流动相缓冲液平衡具有宽分离范围的尺寸排阻色谱柱。然后，在相同流速下将100微升溶解的膜样品注入色谱柱，并利用荧光光学系统监测洗脱曲线。