二维半变性琼脂糖凝胶电泳:一种基于尺寸异质性分离多态性淀粉样蛋白纤维的技术

淀粉样蛋白纤维是错误折叠蛋白质的聚集体，表现出大小异质性。这些纤维对阴离子洗涤剂（如SDS）具有抗性，可以使用二维半变性琼脂糖凝胶电泳进行分析。

首先，取一个预组装的、含有SDS的大孔径琼脂糖凝胶。高孔隙率允许在运行过程中分离完整的纤维。用含有 SDS 的运行缓冲液覆盖凝胶。

将含有淀粉样蛋白纤维的细胞裂解物加载到凝胶中。SDS 的存在和样品加热步骤的缺失创造了半变性条件，其中洗涤剂与高抗性淀粉样蛋白结合，为完整的纤维赋予均匀的负电荷。

适当的电压下在第一个维度运行凝胶。电场导致带负电的淀粉样蛋白向带正电的阳极迁移。

运行过程中，较小的纤维与较大的纤维相比迁移得很快 - 形成涂抹状带状图案，表明尺寸异质性。

完成后，垂直旋转凝胶并在二维空间中运行。在此维度中，纤维的移动方式与第一段相同，根据其尺寸进行分离。这会产生对角线涂抹，因为较小的纤维比较大的纤维迁移得更快。

尖锐对角线条带的形成证实了完整但异质的淀粉样蛋白纤维细胞群。

要制备凝胶，请在玻璃烧杯中将 2 克琼脂糖粉末添加到 200 毫升 TAE 缓冲液中。然后，在微波炉中加热烧杯以融化琼脂糖。

接下来，加入 1 毫升 20% SDS 至终浓度为 0.1%。轻轻旋转烧杯。

接下来，将液体琼脂糖倒在 15 厘米 x 14 厘米的凝胶板上。要去除任何气泡，请使用 1 毫升移液器。然后，将 20 孔梳子放在凝胶顶部。

接下来，在凝胶的最右侧通道中加入约 60 微克全细胞裂解物。使用含有0.1%SDS的TAE缓冲液作为电泳缓冲液，在60伏电压下运行凝胶约四个小时。

要在二维空间运行凝胶，请小心地将凝胶逆时针旋转 90 度。然后，在 60 伏的电压下运行监狱约四个小时。