二维半变性琼脂糖凝胶电泳：一种基于大小异质性分离多态性淀粉样纤维的技术

淀粉样纤维是错误折叠蛋白质的聚集体，具有大小异质性。这些纤维对阴离子去垢剂（如SDS）具有抗性，因此可采用二维半变性琼脂糖凝胶电泳进行分析。

首先，取一块预先制备好的含有 SDS 的大孔径琼脂糖凝胶。其高孔隙率可在电泳过程中实现完整纤维的分离。用含有 SDS 的电泳缓冲液覆盖凝胶。

将含有淀粉样纤维的细胞裂解液上样至凝胶中。SDS 的存在以及不进行样品加热步骤可形成部分变性条件，在此条件下，去垢剂会结合到高度抗性的淀粉样蛋白上，使完整的纤维带上均匀的负电荷。

在第一维以适当的电压进行凝胶电泳。电场促使带负电荷的淀粉样蛋白向带正电的阳极迁移。

在电泳过程中，较小的纤维比大的纤维迁移得更快，形成类似拖尾的条带模式，表明其大小具有异质性。

完成后，将凝胶垂直旋转，进行第二维电泳。在此维度中，纤维的迁移方式与第一维相同，根据其大小进行分离。由于较小的纤维比大的纤维迁移得更快，因此会形成一条对角线状的弥散条带。

清晰的斜带形成证实了存在完整但异质的淀粉样纤维种群。

制备凝胶时，将 2 克琼脂糖粉末加入盛有 200 毫升 TAE 缓冲液的玻璃烧杯中。然后将烧杯放入微波炉中加热，使琼脂糖溶解。

接着，加入1毫升20%的SDS，使其终浓度为0.1%。轻轻摇动烧杯。

接下来，将液体琼脂糖倒入一个15 cm × 14 cm的凝胶板上。使用1毫升移液器去除任何气泡。然后，在凝胶上方放置一个20孔梳子。

接下来，在凝胶最右侧的泳道中加入约 60 微克的全细胞裂解液。使用含有 0.1% SDS 的 TAE 缓冲液作为电泳缓冲液，在 60 伏电压下运行约 4 小时。

进行第二维电泳时，小心地将凝胶逆时针旋转90度。然后以60伏电压运行电泳约四小时。