毛细管电泳：一种用于分析荧光标记聚合酶链式反应扩增子的技术

为了通过毛细管电泳确定DNA片段的大小，首先取一个多孔检测板。每个孔中含有经荧光标记、大小不同的PCR扩增产物——即PCR循环后获得的双链DNA寡核苷酸。

向凝胶孔中加入若干不同大小的双链DNA片段，作为大小标准。这些DNA分子均带有荧光标记，便于识别。

向孔中加入强变性剂甲酰胺，并在高温下加热。此步骤可使DNA变性，形成单链片段，从而更容易穿过凝胶孔。

将样品板放入片段分析仪中，该分析仪的毛细管系统内已预装聚合物凝胶。

施加高电压，通过电泳动力学将DNA从加样孔中引入阴极（负极端）的细径毛细管中。带负电荷的DNA分子向带正电的阳极迁移。较短的DNA片段所受摩擦阻力较小，因此在凝胶中的迁移速度比长片段更快。

在电泳迁移过程中，DNA 会穿过激光束的路径，导致染料产生荧光。染料发出的荧光信号被检测器捕获，随后转换为电泳图谱——即一幅以不同颜色的独立峰形表示每种荧光标记 DNA 的图谱。

将未知的DNA片段峰与参考峰进行比较，以分析其大小。

在确认PCR扩增产物后，使用新的PCR条管或板，将PCR产物用纯水按1至10的比例稀释。充分涡旋混匀并短暂离心。在通风橱内操作，于离心管中配制含有甲酰胺和参考大小标准溶液的混合液。

根据待分析的PCR产物数量，使用文中详述的试剂体积，并预留10%的额外体积。

短暂涡旋混匀，将9.5 µL分装至PCR板的各个孔中，根据所用毛细管电泳系统的规格选择合适的孔板。然后加入0.5 µL稀释后的PCR产物。密封后短暂离心。

然后，将含有样品的板放入PCR扩增仪中，在95摄氏度下变性3分钟，随后降温至4摄氏度并保持无限长。在1,000 × g下离心1分钟。小心移除密封膜，按照制造商说明书将板加载到校准的毛细管电泳系统上。

根据所选仪器选择适当的试剂进行片段分析毛细管电泳，并按照论文中的描述调整运行条件。