碱性单细胞凝胶电泳：一种用于化疗后单个癌细胞DNA损伤定量检测的高灵敏度技术

化疗药物可在癌细胞中诱导单链和双链DNA断裂，导致DNA损伤和细胞死亡。

为了定量DNA损伤，将接受化疗药物处理的癌细胞与熔融的低熔点琼脂糖混合。将此混合物滴加到预先涂有琼脂糖的载玻片上。让熔融的琼脂糖凝固，使细胞包埋于多孔凝胶基质中。

使用含有高浓度去垢剂和盐的裂解缓冲液进行处理。去垢剂可溶解细胞膜和核膜。此外，高盐环境可将组蛋白从DNA上剥离，留下与核基质相连的超螺旋DNA。

在碱性电泳缓冲液中孵育。碱性环境会导致DNA超螺旋解旋，暴露出单链和双链DNA断裂。

将载玻片放入含有电泳缓冲液的凝胶托盘中。启动电泳。

由于DNA带负电荷，会向正极阳极移动。受损的DNA片段从细胞核中迁移出来，穿过 porous gel 基质，其中较长的片段比短片段迁移得更慢。相反，未受损的DNA不易迁移，会保留在细胞核内。 

电泳后，用荧光核酸染料溶液对细胞进行染色。染料分子会与DNA结合。

在荧光显微镜下，含有受损 DNA 的单个细胞会呈现出荧光彗星结构。彗星的“头部”代表未受损的 DNA，而“尾部”则由受损的 DNA 片段组成。

彗星尾的长度和强度反映了单个经化疗处理的癌细胞中 DNA 损伤的程度。

将细胞悬液与1%熔化的低熔点琼脂糖按1:10的体积比混合。通过上下轻柔吹打混匀，立即吸取30微升滴加到载玻片上。用移液器吸头侧面将琼脂糖-细胞混合物铺开，确保形成一层薄层。将载玻片平放在4摄氏度、避光条件下静置10分钟。随后将载玻片浸入4摄氏度的裂解液中，避光孵育1小时至过夜。

进行碱性彗星实验时，轻轻将载玻片从裂解液中取出，沥去多余液体，然后在4摄氏度避光条件下将载玻片浸入AES溶液中1小时，以使DNA解旋。

在电泳胶片托盘中加入预冷的AES溶液，液面高度不得超过胶片上方0.5厘米。将胶片放入托盘后盖上盖子。将电源电压设置为每厘米1伏，在4摄氏度条件下运行30分钟。电泳完成后，倒掉胶片上多余的AES溶液。

将载玻片在室温蒸馏水中轻轻浸入两次，每次五分钟。随后，将载玻片在室温下轻轻浸入70%乙醇中五分钟。

开始染色程序，将载玻片在37摄氏度避光条件下干燥10至15分钟。随后，向每张载玻片的干燥琼脂糖上加入50至100微升绿色荧光核酸染色液，在室温避光条件下染色15分钟。用蒸馏水短暂冲洗载玻片，并在37摄氏度避光条件下完全干燥。