基于微流控毛细管电泳的PCR产物片段长度分析：一种基于微芯片的按大小分离DNA片段的电泳分离技术

微流控电泳是一种在微毛细管内分离不同大小DNA片段的技术。

首先，取一个具有指定孔位的多孔微流控芯片，这些孔位用于装载凝胶聚合物与荧光染料的混合物、DNA 样品以及已知分子量的 DNA 标准品。这些孔位通过微通道网络相互连接。

将凝胶-染料混合物加入指定的加样孔中。将芯片安装在已预装空注射器的灌注工作站上。下压注射器推杆，施加压力以将凝胶-染料混合物压入分离微通道中。

取出芯片，并将其他组分移液至相应的孔中。向含有分子量标准品和样品的孔中加入标记物——一种用于校准样品片段大小的内参标准。

将微芯片插入片段分析仪以运行芯片。芯片进入后，施加的电压产生电泳力，推动样品从样品孔进入样品加载微通道，并由此到达该通道与分离通道之间的交叉连接处。电流有助于样品进入分离微通道。

荧光染料分子嵌入带负电荷的DNA片段，这些DNA片段根据其分子大小以不同的电泳速度向阳极移动——较小的片段比大片段迁移得更快。因此，这些片段分离成不同大小的条带并发出荧光。

基于激光的检测器测量每条带的荧光，并将其记录为电泳图谱，该图谱以不同的峰显示不同大小的DNA。

开始之前，将DNA染料浓缩液、DNA凝胶基质、DNA标记物、DNA梯度标准品以及纯化的DNA样本恢复至室温。通过更换注射器并调节底板来设置上样工作站，然后松开注射器夹的杠杆，将其滑动至顶部位置。

启动片段分析软件并准备胶-染料混合液。将染料浓缩液涡旋震荡10秒，然后离心沉淀。接着，向胶基质小瓶中加入25微升染料溶液，涡旋震荡以充分混匀。

将凝胶-染料混合液转移至离心过滤器中。放入离心机，于1,500 × g 条件下离心10分钟。当准备上样凝胶-染料混合液时，将一块新的DNA芯片插入上样工作站，并向标记为“G”的孔中加入9微升凝胶-染料混合液。

关闭引液站，确保推杆位于1毫升刻度处。按下注射器推杆，直至被卡扣固定。准确等待30秒，然后松开卡扣。再等待5秒，随后缓慢将推杆拉回至1毫升位置。

打开上样工作站，在标记为“G”的孔中加入9微升凝胶-染料混合物。在标记有梯形符号的孔以及每个12个样本孔中加入5微升的分子量标记物。

向带有 ladder 标记的孔中加入 1 微升 DNA 标准品，向样品孔中加入 1 微升 PCR 产物或水。将芯片涡旋震荡 1 分钟至 2,400 转/分钟。将芯片插入生物分析仪中，并在五分钟内开始运行。