非还原性SDS-PAGE：一种分析二硫键连接的多聚体蛋白复合物的方法

多聚体蛋白通过其半胱氨酸残基之间形成的分子间共价二硫键得以稳定，这对于维持其结构和功能完整性至关重要。

为了通过非还原性PAGE分析此类复合物，取所需浓度的二硫键稳定的蛋白质，加入非还原性上样缓冲液，并对样品进行加热。

该缓冲液含有 SDS，可使蛋白质整体带负电荷，并含有示踪染料以观察其在凝胶中的迁移。缓冲液中不含任何还原剂，从而保持二硫键完整，有利于多聚复合物维持完整状态。

将各个复合物加入已组装好的凝胶电泳装置中指定浓度的聚丙烯酰胺凝胶孔内。另取一孔加入已知大小的蛋白质分子量标准品。将凝胶孔浸入含SDS的电泳缓冲液中，并将装置连接至电源。

电流迫使带负电的蛋白质复合物穿过凝胶的孔隙，向阳极（正极）移动。由于蛋白质复合物均带有均匀的负电荷，因此分离基于分子大小进行，其中多聚体在特定位置形成一条明显的高分子量条带。

将分离的蛋白质条带大小与蛋白分子量标准（ladder）进行比较。凝胶中低分子量条带的缺失表明完整多聚体复合物成功分离。

通过混合 25 毫摩尔 Tris、192 毫摩尔甘氨酸和 0.1%（质量/体积）SDS，配制 1 升 1× Tris-甘氨酸电泳缓冲液。然后组装 SDS-PAGE 电泳装置。

按照制造商的说明书打开16%预制TGX SDS-PAGE凝胶盒，取出凝胶板。移除堵塞加样孔的梳子以及凝胶底部的封条，将凝胶放入电泳装置中。向电泳槽中加入1×电泳缓冲液，直至加样孔完全浸没于液体中。

使用塑料移液管，用电泳缓冲液冲洗胶孔。将样品与10微升预染标准蛋白Marker一同上样至凝胶中。最后，在200伏电压下电泳，直至染料前沿距离凝胶底部约1厘米处。