液相等电聚焦:一种从粗匙羹藤提取物中分离生物活性分子的电泳技术

从预组装的等电聚焦 IEF 电池 - 液相电泳装置开始。该色谱柱是一个分隔的水平多孔室，两端有不同的正极和负极。

现在，以含有不同电荷成分的复杂混合物的植物提取物为例，具有不同的等电点 pI，即分子上的净电荷为零的 pH 值。

提取物中补充有可变电荷的两性电解质，以促进以后样品组分的分馏。

样品装入色谱柱的装载端口。目前，IEF 色谱柱具有恒定的 pH 值。接下来，施加高压以启动电泳。

电场下，可溶性两性电解质向带相反电荷的电极迁移，并在色谱柱上建立线性pH梯度。样品组分开始通过液相 pH 梯度迁移，而 pH 值低于其 pI 的组分带有净正电荷。

它们向负极迁移，直到组分达到其 pI，在那里它们的电荷中和，迁移停止。类似地，pH 值高于其 pI 的组分向正极迁移，并在达到 pI 时停止。这会根据样品组分的 pI 将其分离到聚焦的隔室中。收获纯化馏分以进行进一步分析。

0.6 克匙羹藤植物提取物加入 60 毫升蒸馏水中。通过在滚筒中混合五分钟来溶解植物提取物。

要去除不溶性颗粒，请将溶液以 10,000 x g 离心五分钟。将上清液转移到 150 毫升玻璃烧杯中，并加入两性电解质以制成体积百分比为 1% 的溶液，约 0.6 毫升。

使用 50 毫升注射器和 1.5 英寸、19 号钝端针头，通过样品收集端口将溶液加载到 IEF 池中。然后，从支架上取下电池，并轻敲电极室以去除并去除任何气泡。

将设备连接到冷却水。在恒定的 15 瓦功率下，开始分馏。运行 IEF 装置，直到电压达到恒定值，大约三个小时。

按下 Harvest ON 按钮后，将馏分收集器引脚与收集端口对齐。将销钉推过密封胶带，开始收集匙羹藤馏分。