液相等电聚焦：一种从粗制 Gymnema sylvestre 提取物中分离生物活性分子的电泳技术

从一个预组装的等电聚焦（IEF）电泳单元开始——一种液相电泳装置。该柱体为分隔式的水平多孔腔室，两端分别具有明确的正极和负极接头。

现在，取含有多种不同电荷成分的植物提取物，这些成分具有不同的等电点（pI）——即分子净电荷为零时的pH值。

提取物中添加了带有不同电荷的两性电解质，以促进后续样品组分的分离。

将样品加入色谱柱的上样口。目前，IEF 色谱柱具有恒定的 pH 值。接下来，施加高电压以启动电泳。

在电场作用下，可溶性两性电解质向带相反电荷的电极迁移，并在柱内建立线性 pH 梯度。样品组分开始通过液相中的 pH 梯度迁移，当其所在位置的 pH 低于其等电点（pI）时，该组分带净正电荷。

这些组分将向负极迁移，直至达到其等电点（pI），此时其电荷被中和，迁移停止。同样，pH高于其pI的组分则向正极迁移，并在其达到等电点时停止。该过程根据各组分的pI将其分离至聚焦的区带中。收集纯化后的组分用于后续分析。

将0.6克Gymnema sylvestre植物提取物加入60毫升蒸馏水中。通过在滚轴混匀仪中混合5分钟，使植物提取物溶解。

为去除不溶性颗粒，将溶液在10,000 × g 条件下离心五分钟。将上清液转移至一个150毫升的玻璃烧杯中，并加入两性电解质，使其终体积浓度为1%，约0.6毫升。

使用50毫升注射器，配以1.5英寸、19号钝头针头，通过样品收集口将溶液注入IEF电泳槽中。然后，将电泳槽从支架上取下，轻敲电极室以松动并排除任何气泡。

将设备连接至冷却水。在持续供应15瓦功率的条件下，开始进行分馏。运行等电聚焦电泳装置，直至电压达到稳定值，大约需要三小时。

按下 Harvest ON 按钮后，将组分收集器的针头与收集口对齐。将针头穿过密封膜，开始收集 Gymnema sylvestre 组分。