基于三室阵列的阻抗测定:一种通过测量电阻抗来评估癌细胞侵袭潜力的实时分析技术

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癌症相关基质细胞分泌化学因子,可触发驻留在组织基底膜上的转移性肿瘤细胞。因此,癌细胞侵入基底膜并向组织的细胞外空间迁移。

要在体外测量癌细胞的侵袭能力,请从带有多个三腔阵列的多孔板开始。在每个阵列中,底部腔室都有基质细胞的贴壁培养物。带有熔融阻抗测量微电极(测量细胞电活动的微型电极)的顶部腔室覆盖着癌细胞,癌细胞粘附在电极上方存在的细胞外基质涂层微孔膜上。

在基于阻抗的分析仪上孵育期间,基质细胞将趋化因子释放到培养基中,这些趋化因子向癌细胞移动。这些因素穿过位于中间腔室底部的半透膜。

基质细胞分泌因子向贴壁癌细胞发出信号,转化为侵袭性表型。作为响应,侵袭性细胞通过微孔膜迁移,到达膜另一侧的叉状电极。

随着时间的推移,随着越来越多的癌细胞粘附在电极上,它们会导致细胞阻抗 - 阻碍细胞电流流动。细胞阻抗的测量表明癌细胞的侵袭潜力。

将所有三个无菌室放入组织培养罩中。将旋钮定位在下腔室的短边,并调整下腔室的方向,使旋钮朝向实验者。

30,000 至 50,000 个细胞加入 90 微升培养基中的每个孔中,从下室中不形成任何气泡。在两个下腔室中使用5%的胎牛血清补充培养基作为细胞运动的阳性对照,并使用0%血清补充培养基作为阴性对照。

下腔室在引擎盖中沉淀 90 到 10 分钟后,将其旋转 15 度。然后,将中间腔室放在顶部,使下腔上的旋钮滑入中间腔室的凹口中。垂直向下推动腔室,直到从组件的每个长边听到咔嗒声。

将 160 微升无血清培养基添加到中间腔室的所有孔中。确保在填满孔后可以看到圆顶形弯月面,并将电极朝下的顶部腔室放在中间腔室上,以对齐中间和顶部腔室上的蓝点。垂直向下推腔室,直到从组件的每个长边听到咔嗒声。

向顶部腔室中加入 20 至 50 微升无血清培养基。将组件安装在组织培养箱中的两用细胞分析仪上,等待 30 分钟后再测量背景。

打开细胞分析仪软件,然后选择要使用的支架,然后单击"消息"选项卡,并确保它显示"连接正常",以确保阵列正确放置在支架中并且电极与传感器正确对齐。

单击"实验说明"选项卡并填写有关实验的所有可能信息。然后,单击"布局"选项卡并填写数组布局的描述。然后,单击"计划"选项卡并从"步骤"菜单中添加两个步骤;一个具有一次扫描的后台步骤,以及一个具有 100 次扫描的测试步骤。

列在两用细胞分析仪培养箱中放置 30 分钟后,单击"播放"按钮开始背景测量。

完成背景测量后,从支架上取下阵列,并将其放回细胞培养罩中。然后,在 100 微升无血清培养基中加入 30,000 至 50,000 个细胞到顶部腔室的每个孔中。这些是电极成功通过膜迁移后将检测到的细胞。

让组件在引擎盖中静置 30 分钟,然后安装在两用电池分析仪上进行阻抗测量。

阵列放回两用电池分析仪中,然后检查"消息"选项卡中是否有"连接正常"消息。单击"播放"按钮开始阻抗测量,然后单击"绘图"选项卡以监控信号的进度。

如果在 25 小时之前到达终结点,请单击"执行"下拉菜单中的"中止"步骤。要导出数据,请右键单击图表,以列表格式选择"复制",然后将数据粘贴到电子表格中。

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Last updated: 11 July 2026