基于浴酚蒽啉磺酸盐的比色法检测:一种简单快速测定小鼠肝组织中非血红素铁含量的方法

0 次观看3:03 分钟 • July 8th, 2025

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在组织中,铁是一种对多种代谢过程至关重要的必需矿物质,通常以结合形式存在于血红素蛋白和非血红素铁蛋白中。血红素蛋白包含与卟啉环结合的亚铁或血红素铁,而非血红素铁蛋白则缺乏卟啉环结构,主要由三价铁或非血红素铁组成。

为了测定小鼠肝组织中的非血红素铁含量,使用低浓度盐酸和三氯乙酸处理采集并干燥的小鼠肝组织碎片。在高温下孵育以消化组织,并促进酸诱导的蛋白质沉淀。

由于酸浓度较低,非血红素铁会从相关蛋白质中释放出来。而血红素铁因与卟啉环结合,不受影响。

冷却后,将含有非血红素铁的上清液转移至多孔板中。加入显色性铁螯合剂邻菲罗啉磺酸钠(BPS),并补充含有巯基乙酸(一种还原剂)的适当缓冲液,混匀后孵育。

巯基乙酸将所有三价非血红素铁还原为二价铁,后者可与BPS以1:3的比例结合,形成一种高度稳定、呈粉红色的复合物。此外,巯基乙酸可防止铜等可能与BPS发生相互作用的污染性二价金属阳离子造成的干扰。

将多孔板放入微孔板读数仪中,测定粉红色亚铁-BPS复合物的吸光度,该吸光度代表小鼠肝组织碎片中非血红素铁的浓度。

将每块干燥的组织转移至一个1.5毫升的微量离心管中。向管中加入1毫升酸混合液,并盖紧管盖。同样地制备一份酸空白对照,唯一不同的是其中不加入组织。

将试管在 65 摄氏度下孵育 20 小时以消化组织。

冷却至室温后,使用装有塑料吸头的微量移液器将500 µL澄清的酸提取液转移至新的1.5 mL微量离心管中。

将显色反应直接加入平底、96孔、透明、未处理的聚苯乙烯微孔板中。室温孵育15分钟。

使用酶标仪,以去离子水为参比,在535纳米波长下测定样品的吸光度。

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最后更新:15 八月 2026