0 次观看 • 4:08 分钟 • July 8th, 2025
血管生成是指在发育和病理条件下，由现有血管形成新血管的过程。血管内表面的内皮细胞与血管外侧的周细胞（即支持细胞）之间进行广泛的通讯，这对血管生成至关重要。
研究 体外 血管生成始于悬浮在纤维蛋白原溶液中的内皮细胞和周细胞包被的微载体珠——纤维蛋白原是一种可溶性糖蛋白，可作为纤维蛋白的前体。
现在，将珠子悬浮液移入含有凝血酶溶液的培养板中，凝血酶是一种蛋白水解酶，并进行孵育。凝血酶与纤维蛋白原分子结合，促使其裂解形成不溶性的纤维蛋白单体，进而形成聚合的纤维蛋白凝胶。此步骤可确保包被细胞的珠子被包埋在纤维蛋白凝胶中。
接下来，将成纤维细胞（结缔组织前体细胞）的培养物接种到纤维蛋白凝胶上，并进行孵育以诱导成纤维细胞的活化。
孵育期间，成纤维细胞分泌关键的促血管生成生长因子，可触发内皮细胞活化。同时，黏附的周细胞与内皮细胞共同分泌信号分子，促进内皮细胞在纤维蛋白凝胶中的出芽。
内皮细胞出芽表现为周细胞包裹的细长细胞突起，代表了血管生成的早期阶段。
在显微镜下以20倍放大倍数观察微载体包被的珠状物，以确认所有珠状物均已被内皮细胞充分包被。
将培养板转移至超净工作台，使用 P1000 移液器剧烈吸取并吹打包被珠溶液，使细胞从培养板底部脱离，然后将上清液转移至各自的离心管中。
让珠子在管底静置三分钟。然后使用 P1000 移液器尽可能吸走上清液，注意不要扰动珠子聚集体。每管中用一毫升完全培养基重悬珠子，并让珠子再静置 30 至 60 秒。再次使用 P1000 移液器吸去上清液，并用新鲜的完全培养基将游离的内皮细胞从珠子悬液中洗涤除去，重复此洗涤步骤两次，操作方法如前所述。
第三次洗涤后，将磁珠重悬于2.5毫升纤维蛋白原溶液中。在24孔玻璃底板的每孔中加入13微升凝血酶溶液。然后，将0.5毫升磁珠/纤维蛋白原溶液加入各孔中，注意将磁珠直接小心地通过移液器加入凝血酶溶液中，并缓慢上下吹打两到三次，以充分混匀溶液。
所有孔加样完成后，在室温下将凝血酶-纤维蛋白原溶液置于层流罩中预凝固30分钟。孵育结束后，小心将培养板转移至37摄氏度培养箱中，继续孵育1.5至2小时。
待凝胶完全凝固后，用完全培养基将正常人肺成纤维细胞重悬至浓度为 2 × 104 个细胞/毫升，并向每孔加入 1 毫升成纤维细胞悬液。随后，将培养板放回细胞培养孵箱中。