0 次观看 • 4:25 分钟 • July 8th, 2025
在革兰氏阴性细菌中，脂多糖内毒素是细菌外膜的重要组成部分。
从结构上看，内毒素由最外层的多糖链——O抗原连接而成 通过 脂质A的核心部分，一种对内毒素活性至关重要的免疫刺激性糖脂。
为了研究内毒素活性，取一支含有合适缓冲液的试管，其中包含抗脂质A抗体、酵母聚糖（一种外源性中性粒细胞激活剂）和鲁米诺（一种化学发光试剂）。
取含有内毒素和血细胞（包括中性粒细胞）的感染血液样本，悬浮于最佳体积中。将试管置于生理条件下孵育。
孵育期间，抗脂质A抗体识别内毒素的脂质A组分并与其结合 通过 抗原结合域，从而形成抗体-内毒素复合物。
内毒素结合抗体的FC区与中性粒细胞上的相应受体结合，将连接的内毒素呈递给中性粒细胞。这种结合可作为中性粒细胞的启动刺激信号，触发其活化。
活化的中性粒细胞吞噬酵母聚糖并启动免疫反应，导致中性粒细胞迅速释放活性氧（ROS）。这些活性氧促进鲁米诺氧化，从而通过化学发光产生光信号。
化学发光信号强度对应于血液样本中的内毒素活性。
首先，将要使用的 EA 管放入试管架中并拧开管盖。使用排枪从试剂瓶中吸取 1 毫升 EA 试剂，沿管壁加入第 1、第 2 和第 3 号管中。轻轻倒置采血管 20 次，以充分混匀患者的血液样本。然后，用移液器将 0.5 毫升患者血液加入第 4 和第 5 号管中。将第 4 号管涡旋振荡 10 秒。
将装有所有EA试管的试管架放入恒温振荡培养箱中，盖上盖子，在37摄氏度下孵育10分钟。孵育结束后，打开培养箱盖子，从振荡器中取出试管架。
涡旋5号管。使用无菌吸头，将40微升血液以复孔方式加入1号管和2号管中。
涡旋4号管。使用同一枪头，将40微升血液从4号管转移至3号管，重复一份。
依次涡旋振荡六个最终的测试管。将试管架放回培养摇床并盖上盖子。将摇床转速设为 100 RPM，开始振荡 14 分钟。
将带有 EA 标记的芯片卡插入化学发光仪，然后按下“开始”。在 14 分钟孵育结束后，按照化学发光仪屏幕上显示的说明进行操作。在将每支试管放入化学发光仪的样品架之前，轻轻涡旋振荡 10 秒。
打开样品抽屉，将1号管放入样品架中。然后关闭样品抽屉，等待相对光单位读数。按照文本方案中的说明，对2号和3号管以及所有重复样本重复此读数过程。
所有试管处理完毕后，EA 结果将自动计算并打印。
对每个需要检测的血液样本重复整个检测流程。将EA检测试剂盒及其组分保存在原始密封包装内，储存温度为2至25摄氏度。