小鼠器官离体葡萄糖摄取评估的替代测量技术：细胞外荧光葡萄糖类似物消耗量测定

在组织中，细胞外的葡萄糖通过特定的葡萄糖转运蛋白以易化扩散的方式进入细胞。

葡萄糖在细胞质中被分解为丙酮酸 通过 糖酵解，一种代谢途径，通过生成三磷酸腺苷（ATP）的形式为细胞代谢过程提供能量。

测量葡萄糖摄取 离体从新鲜收获的小鼠小尺寸肝脏组织开始。加入适当的缓冲液以维持生理条件。

接着，将组织转移至含有无葡萄糖培养基的多孔板中。随后在添加了脱氧葡萄糖（一种荧光标记的葡萄糖类似物）的无葡萄糖培养基中进行孵育。组织的小尺寸有利于脱氧葡萄糖的进入。

在无葡萄糖的条件下，脱氧葡萄糖通过葡萄糖转运蛋白进入细胞。在细胞内，脱氧葡萄糖发生磷酸化，但不再进一步代谢，从而导致其在细胞内积累。

在预定时间点收集含有未利用的荧光标记脱氧葡萄糖的培养基。使用微孔板读数仪检测细胞外脱氧葡萄糖的荧光强度，该信号可反映脱氧葡萄糖在组织细胞内的摄取水平。

将收获的组织或器官置于含有 PBS 的 6 孔板中，孵育 1 分钟。每种组织或器官应在单独的孔中处理。孵育 1 分钟后，将每块组织放置于无菌纸巾上以吸除 PBS。

将组织或器官转移至另一六孔板中，六孔板内含 4,000 µL 无葡萄糖 DMEM，孵育 2 分钟。2 分钟后，移除并转移组织至另一六孔板的孔中，六孔板内含 0.29 mM FD-葡萄糖工作液。将含有组织的六孔板置于 37 °C 条件下，在 FD-葡萄糖工作液中孵育。

在孵育 0、10、20、30、40、60、90 和 120 分钟后，从每个孔中收集 100 微升 FD-葡萄糖工作液，并将收集的 100 微升 FD-葡萄糖工作液转移至 96 孔板，用于分析细胞外 FD-葡萄糖消耗的动力学。收集前后需轻轻振荡混匀。

使用酶标仪，在485纳米激发波长和535纳米发射波长下测定荧光。