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主动脉壁主要含有平滑肌细胞(SMCs),其内含收缩蛋白装置,可通过收缩和舒张来调节主动脉的血流。
测量主动脉平滑肌细胞的收缩反应 体外获取一个含有电阻细胞-基质阻抗传感(ECIS)传感器阵列的多孔板。每个阵列在孔底均设有由绝缘膜界定的金薄膜电极。用明胶包被各孔。
将原代人平滑肌细胞(SMC)悬液接种至各孔中。将含ECIS的孔板转移至与放大器和数据采集系统相连的板架上,确保电极与板架接触良好。在电极间施加微小的恒定交流电流,以测量其间的电势差。
孵育过程中,平滑肌细胞(SMCs)会黏附并铺展在明胶包被的表面。这些细胞表现为绝缘体,限制了电极之间的电流流动。随着更多细胞附着于表面,电流进一步减少。因此,阻抗(即对电流流动的阻碍)以及电势随之升高。最终,细胞在电极上增殖并形成单层细胞层。
用钙离子载体处理平滑肌细胞,以促进钙离子跨细胞膜转运。细胞外钙离子内流可激活收缩装置,诱导细胞收缩。
受刺激的平滑肌细胞(SMCs)在电极上发生收缩并失去细胞间接触。细胞对电极表面覆盖度的降低导致阻抗减小,从而实现对平滑肌细胞收缩的实时定量检测。
使用自动细胞计数器对细胞进行计数,将平滑肌细胞(SMCs)以每孔30,000个细胞的接种密度,每孔200微升平滑肌细胞培养基,接种于明胶包被的ECIS板中,每组设三个重复孔。将接种有平滑肌细胞的板放入细胞培养孵箱中的ECIS 96孔板架上。
双击"ECIS Applied Biophysics software"以打开程序,然后按下"Setup"按钮。在左下方标有"Well Configuration"的面板中,检查所有电极是否均与支架接触。如果电极未正确连接,请在开始测量前调整支架中的培养板位置。
现在,在同一面板中通过点击“阵列类型”选择芯片类型。接下来,准备两支分别设定为2微升和150微升体积的移液器。开始刺激前,先在软件中按下“标记”,并添加一条注释。
为了刺激细胞,打开培养皿盖并将其放置在孵育箱内无菌表面上。然后,尽快用移液器向每个孔中加入 2 微升离子霉素工作液,以诱导平滑肌细胞收缩。
所有细胞刺激完成后,使用第二支移液器混匀各孔中的培养基。