体外测量 SMC 收缩:一种使用电池-基底阻抗传感评估平滑肌细胞收缩的非侵入性方法

0 次观看3:45 分钟 • July 8th, 2025

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主动脉壁主要有平滑肌细胞或 SMC,其中包含收缩和放松以调节主动脉血流的收缩蛋白机制。

为了在体外测量主动脉SMC的收缩反应,请获得包含电细胞-基板阻抗传感或ECIS传感器阵列的多孔板。每个阵列在井底都包含金膜电极,用绝缘膜勾勒出。在井上涂上明胶。

将原代人SMC悬浮液接种到孔中。将含有 ECIS 的孔板转移到连接到放大器和数据采集系统的板支架上,同时确保电极与支架接触。在电极之间施加小的恒定交流电以测量它们两端的电位。

孵育过程中,SMC 粘附并扩散到明胶涂层上。电池充当绝缘体,限制电极之间的电流流动。随着更多的细胞附着在表面上,电流进一步减少。结果,阻抗或与电流的阻力和电位增加。最终,细胞在电极上增殖并形成单层。

用钙离子载体处理SMC,以促进钙离子跨细胞膜的运输。细胞外钙离子流入激活收缩装置,诱导收缩。

受刺激的 SMC 收缩并失去电极上的细胞间接触。由此产生的电极表面覆盖率的减少降低了阻抗,有助于实时量化SMC收缩。

使用自动细胞计数器对细胞进行计数,并在明胶包被的 ECIS 板中的 200 微升 SMC 培养基中以每孔 30,000 个细胞的接种密度将 SMC 一式三份接种。将装有 SMC 的板放入细胞培养箱中的 ECIS 96 孔支架中。

"ECIS Applied Biophysics 软件"打开程序,然后按"设置"按钮。检查所有电极是否与支架接触,在标有"孔配置"的左下面板中。如果电极连接不正确,请在开始测量之前调整支架中的板。

现在,通过单击"阵列类型"在同一面板中选择板类型。接下来,准备两个体积为 2 微升和 150 微升的移液器。在开始刺激之前,按软件中的"标记",并发表评论。

要刺激细胞,请取下盖子,并将其放在培养箱内的无菌表面上。然后,通过尽快将 2 微升离子霉素工作溶液移液到每个孔中来诱导 SMC 收缩。

一旦

所有细胞都被刺激,使用第二个移液器在孔中混合培养基。

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最后更新:1 八月 2026