荧光素酶检测：利用基于工程化Nano荧光素酶系统的生物报告系统测量发光信号的高通量检测方法

行业应用价值

基于荧光素酶的生物报告系统可通过发光信号的测量实现对目标蛋白的定量检测，支持早期发现阶段的高通量筛选。该方法通过提供可重复且定量的输出结果，直接反映蛋白浓度，从而在靶点验证中提供可预测的可信度。该技术适用于病毒学和传染病研究，尤其可用于针对抗体或配体与病毒抗原（如SARS-CoV-2受体结合域）相互作用的筛选。

生物制药研发中的战略应用

早期发现与靶点验证

• 科学价值：通过量化活细胞系统中靶蛋白的表达水平，实现对治疗假设的验证。
• 操作价值：依赖靶标的存续进行信号重建，支持功能性靶标验证，减少假阳性结果。
• 预测价值：产生与靶标结合程度相关的剂量响应性发光读数，有助于基于靶标结合情况的先导化合物筛选和项目优先级排序。

筛选与检测方法开发

• 检测准备就绪：可产生标准化、可定量的发光信号，适用于多孔板格式和自动化操作。
• 可重复性：依赖于受控的片段互补和底物添加，确保在重复实验中信号生成的一致性。
• 可扩展性：兼容96孔板格式，可用于化合物文库或免疫血清的中通量筛选。

转化与临床前研究

• 转化研究对齐：检测SARS-CoV-2受体结合域，该抗原是疫苗和治疗评估的关键靶点。
• 作用机制去风险化：通过纳米荧光素酶片段互补产生的信号依赖性，确认靶点特异性。
• 临床前连续性：支持在与抗病毒筛选相关的细胞模型中，对靶点调控进行纵向监测。

流程与工作流整合

该检测方法适用于从靶点验证到先导化合物鉴定的整个发现流程，可提供定量的生物报告信号，为抗病毒项目的推进或终止决策提供依据。

• 发现生物学：通过与细胞上清液中目标蛋白浓度相关的可测量发光信号，实现假设验证。
• 筛选：提供标准化、可重复的信号，适用于基于发光仪的96孔板检测。
• 分析学：提供定量的发光读数，可比较不同实验条件下目标物水平。
• 转化研究：通过检测SARS-CoV-2刺突糖蛋白（病毒传染性的关键决定因素），支持抗病毒靶点的验证。
• 企业级复用：分裂纳米荧光素酶系统可适配多种靶标，支持在传染病和肿瘤学多个项目间的重复使用。

运营与企业影响

• 科学价值：通过定量、信号放大的方式检测低丰度蛋白，提高靶点验证的预测可信度。
• 操作价值：通过明确定义的试剂比例（LgBiT：底物）和孵育时间确保检测标准化，降低实验变异性。
• 战略价值：实现快速、高灵敏度的筛选，减少靶点验证过程中的假阳性推进，提升资本使用效率。
• 项目组合影响：基于活细胞系统中可量化的结合数据，促进对靶点进行风险调整后的优先排序。

实施注意事项

• 需要具备分子克隆方面的专业知识，以将目标蛋白与 SmBiT 融合，以及具备贴壁细胞培养维护的细胞培养经验。
• 依赖于可使用的发光仪及配套软件，用于动力学或终点发光检测。
• 需要标准化裂解缓冲液的组成和孵育条件，以确保生物报告分子释放的一致性。
• 针对新靶标的检测需验证融合蛋白的表达水平、稳定性以及 SmBiT 的可及性。
• 在高浓度生物报告分子条件下可能出现信号饱和，需进行稀释步骤以实现准确定量。

生物制药常见问题