扩增发光接近均相测定:一种基于微珠的接近测定，用于筛选抑制蛋白质相互作用的小分子

在生物系统中，蛋白质与其特定伴侣的接近程度是蛋白质-蛋白质相互作用成功的关键决定因素。由于存在小抑制分子，这些蛋白质无法相互靠近，从而破坏它们的相互作用。

为了筛选抑制分子以破坏两种蛋白质（伴侣和共伴侣）之间相互作用，请使用含有各种小分子的多孔板。用附着在孔表面的共同伴侣的供体珠补充孔。这些珠子含有用于化学发光测定的光敏剂。

加入与伴侣衍生肽序列偶联的受体珠浆，这些肽序列与共伴侣特异性结合。这些珠子含有硫氧基染料和可视化所必需的荧光团。

在具有非抑制性分子的孔中，伴侣结合肽和共伴侣之间的高亲和力会吸引受体和供体珠。当抑制剂存在时，珠子保持距离。

使用化学发光阅读器，研究相互作用。在特定波长的照射下，供体珠光敏剂会发射高反应性单线态氧。

由于没有抑制分子，发射的物质到达靠近近端的受体珠并与染料分子反应，引起化学发光。这种能量激活受体珠的荧光团，引起发光。

相反，在具有抑制分子的孔中，单线态氧发生衰变，导致没有发光，表明成功抑制了蛋白质-蛋白质相互作用。

PBS中加入浓度为10微克/毫升的谷胱甘肽供体珠。加入GST-FKBP51至终浓度为10微克/毫升，并在黑暗中在25摄氏度下孵育反应10分钟。

DMSO中连续稀释测试化合物。在 384 孔板的每个孔的角落中加入 0.25 微升测试化合物稀释液，一式三份。

对于阴性对照，添加 0.25 微升 DMSO，对于阳性对照，在孔中加入 0.25 微升 Hsp90 C 端肽。

每个孔中加入 22.5 微升含有谷胱甘肽供体珠和 GST 标记蛋白质的溶液。用手彻底摇晃盘子，在25摄氏度的黑暗中孵育15分钟。

用附着的Hsp90 C端肽在0.5x PBS中稀释受体珠至100微克每毫升浓度。向每个孔中加入 2.25 微升稀释的受体珠。如图所示，摇动板并在黑暗中孵育 15 分钟。

读板仪，测量印版的信号，并按照文本稿件中的描述分析数据。