alamarBlue 检测：一种灵敏的荧光法，用于筛选人工泪液配方对人角膜上皮细胞代谢活性的细胞毒性作用

泪膜——覆盖在眼睛表面的保护性液体——有助于润滑并维持角膜上皮细胞（CECs）处于健康的、代谢活跃的状态。泪膜功能受损（如干眼症中）可导致角膜上皮细胞表面泪液蒸发，增加其感染和炎症损伤的风险。

人工泪液制剂可稳定泪膜并改善保水性，防止细胞脱水。

使用刃天青（alamarBlue）检测法评估待测人工泪液制剂对角膜内皮细胞（CECs）的细胞毒性效应时，首先准备适宜培养基中生长的贴壁人源角膜内皮细胞（CECs）培养物，弃去培养基。

将细胞培养物与特定浓度的人工泪液配方共同孵育。该泪液配方会在细胞表面形成一层包被。根据其组成成分的累积效应，细胞可能会出现代谢活性下降。

接下来，加入含有刃天青的阿玛蓝溶液，刃天青是一种蓝色、弱荧光、无毒且水溶性的染料。

刃天青扩散进入细胞后，在代谢活跃的细胞中主要被线粒体还原酶不可逆地还原，因其接受了呼吸代谢过程中电子供体的电子，生成粉红色、高度荧光的试卤灵，后者可自由扩散出细胞进入溶液中。将含有试卤灵的溶液转移至新的多孔板中。

使用荧光酶标仪测量荧光强度。荧光强度值较低表明细胞代谢活性较低，提示泪液制剂对角膜上皮细胞（CECs）具有不良影响。

移除孔中的培养基，立即向细胞加入 150 微升待测配方或培养基对照溶液。然后将细胞孵育 30 分钟。

移除细胞中的测试溶液，加入 0.5 毫升 10% 的代谢染料溶液。将细胞继续孵育 4 小时。

孵育结束后，从每个孔中取出 100 µL 染料溶液，转移至 96 孔板中。使用酶标仪测量各孔的荧光强度，激发波长设为 540 nm，发射波长设为 590 nm。