一种基于孔板的检测方法：测量药物暴露下脑切片中单胺类物质的释放

单胺类神经递质是一类内源性化学信使，可在神经元之间的接触点——突触处传递信号。严格调控的单胺类神经递质系统对正常的神经元功能至关重要。

筛选测试药物对单胺类物质释放的影响 离体在冰冷的含氧缓冲液中获取包含目标区域的大鼠脑组织切片，以维持组织活性。

将组织切片转移至多孔板的孔中，孔内含有带多孔滤膜插件的装置，并连接气体混合物供应，同时加入含单胺氧化酶抑制剂的氧合人工脑脊液（aCSF）。孵育。

抑制剂扩散进入细胞，使单胺氧化酶失活，从而阻止单胺的降解，增加其可用于储存和释放的浓度。

将含有组织的插入物转移至含有充氧人工脑脊液（aCSF）和测试药物的孔中，孵育。该药物可能刺激单胺类神经递质系统，增加细胞外空间中的单胺类浓度，从而促使这些物质从脑组织释放到溶液中。

释放的单胺类物质穿过多孔插件进入孔板中的孔内，从而与组织分离。

孵育结束后，取出含有组织切片的插入物。收集单胺溶液至含有与高效液相色谱（HPLC）兼容溶剂的离心管中。将管内液体转移至预装的滤过装置中。离心以去除主要污染物。

将获得的滤液上样至HPLC色谱柱，进行色谱分析，以测定单胺类物质的浓度，从而反映受试药物对单胺释放的影响。

为诱导单胺释放，将组织样本转移至自制的48孔流出室的各个孔中，每孔含有0.5至1毫升流出缓冲液，并持续轻柔通气，在37摄氏度下孵育30至50分钟，使样本恢复。

平衡期结束后，将带有脑组织的组织孵育装置转移至含有500微升含或不含药理学试剂的充氧外排缓冲液的孔中，轻轻在孔边缘敲击装置以防止缓冲液在孔间微量转移，在37摄氏度下孵育20分钟。

孵育结束后，将支架转移至另一组含有500 µL外排缓冲液（可含或不含目标药物）的孔中，并将培养板放回细胞培养箱中继续孵育20分钟。

在第二次孵育期间，将第一次孵育孔中的溶液转移至含有50 µL 1 N高氯酸或磷酸的预置冰上的微量离心管中，并将这些管标记为#1。

第二次孵育结束时，将组织托架转移到置于冰上的空孔中，并将第二次孵育的上清液转移至含有50 µL 1 N高氯酸或磷酸的新微量离心管中，置于冰上。将这些管子标记为#2。

当所有上清液转移完毕后，向每孔组织中加入1毫升预冷的解剖缓冲液，用小镊子将每份组织样本转移至新的微量离心管中。移除样本管中的缓冲液，并将组织在-80摄氏度条件下保存。随后，将收集的孵育液转移至微量离心滤膜管中进行离心，滤液置于冰上保存，直至进行高效液相色谱（HPLC）分析。