0 次观看 • 5:00 分钟 • July 8th, 2025
伤口发生后，分泌细胞会产生旁分泌信号分子，以激活成肌细胞——即未分化的肌细胞。被激活的成肌细胞向伤口部位迁移，并在该处增殖，从而促进伤口愈合。
评估成肌细胞的迁移能力 体外取一个含汇合单层小鼠成肌细胞的多孔板，用移液器吸头在单层细胞上划线，形成一条线性无细胞区域，以模拟伤口部位。
小心地向孔中补充培养基，避免扰动伤口区域。
取一个含有贴壁培养的神经嵴细胞（NCCs）——分泌性细胞——的膜性插入物，置于合适的培养基中。将插入物放入孔中，使底部的NCCs靠近伤口区域。将共培养体系在所需条件下孵育适当时间。
在孵育过程中，神经嵴细胞（NCCs）释放出可与成肌细胞上特异性受体结合的信号分子，启动信号级联反应。该信号通路促进成肌细胞内肌动蛋白的重排，从而导致这些细胞在边缘形成如片状伪足和丝状伪足等细胞质突起。这些突起有助于成肌细胞向损伤区域迁移并逐步重新定植，最终实现伤口愈合。
将培养板置于显微镜下，观察伤口愈合情况，其愈合程度与共培养中成肌细胞的迁移能力相关。
当细胞融合度达到70%至80%时，从C2C12培养板孔中移除上清液，并用PBS洗涤细胞一次。
吸除 PBS 后，使用无菌的 P10 移液枪头用力沿单一方向划过细胞单层的整个长度或宽度，开始刮除细胞。细胞划伤后，迅速加入 1 毫升 PBS。
接下来，打开计算机和显微镜。将培养皿载玻片放置在载物台上，并旋转物镜转盘至 5X 放大倍数。启动成像软件，点击 “相机” 选项卡，然后点击 “实时” 按钮，在 “AxioCam IC” 选项卡中观察细胞图像。
确保将光滤镜完全拉出，以允许光线通过至相机和计算机屏幕。手动移动或旋转腔室载玻片，使伤口区域位于实时图像的中央 AxioCam IC 点击以拍摄图像 “快照” 打开一个 “新” 标签旁边的下一个 AxioCam IC 包含图像的标签页
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手动调整腔室载玻片位置，在同一孔内伤口的其他位置再获取两到三张图像。成像完成后，移除各孔中的PBS，加入1毫升C2C12培养基。
通过手动将含有 O9-1 细胞的插入物放入培养板各孔中，组装小室插入式共培养系统。轻柔地将插入物向下推入孔中，使插入物底部刚好位于下方 C2C12 细胞的上方。将小室-插入物结构放回培养箱，让细胞迁移 9 至 12 小时。
为了确定最佳迁移时间，应在划痕形成后6小时观察细胞，随后每隔2至3小时观察一次。当对照条件下的细胞完全覆盖划痕区域时，结束实验。