用于测定蠕虫细胞组分中丙酮酸水平的丙酮酸检测试验

可以使用基于酶的比色法测定来估算丙酮酸的细胞水平——丙酮酸是能量生成生化途径中的一个关键中间产物。

为了测定秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）——一种非寄生性线虫——细胞中的丙酮酸水平，需从成虫中制备含有丙酮酸的细胞组分。处理该溶液以去除细胞蛋白，并收集澄清的细胞组分——即待测样品——其中含有丙酮酸。去除细胞蛋白可确保丙酮酸水平测定结果的准确性。

首先加入含有丙酮酸氧化酶和辣根过氧化物酶以及显色染料的工作试剂。将混合物在避光条件下孵育适当时间。

孵育过程中，丙酮酸氧化酶与其底物丙酮酸发生反应，生成过氧化氢作为副产物。由于缺乏光照，过氧化氢不会发生自发分解。

辣根过氧化物酶催化过氧化氢与生色染料之间的反应，生成有色产物。有色反应产物的强度与样品中丙酮酸的浓度成正比。

孵育结束后，将样品放入酶标仪中，测定吸光度。使用已知丙酮酸浓度的系列稀释液绘制标准曲线。

将测试样品测得的吸光度值绘制在曲线上，以确定测试样品中的丙酮酸浓度。

使用比色法检测试剂盒测定待测样品中丙酮酸的浓度，并进行双样本重复检测。

向96孔板的不同孔中分别加入10微升待测样本，每孔再加入90微升工作试剂。室温下避光孵育30分钟。然后将板放入酶标仪中，在570纳米波长下测定各孔的吸光度。

绘制丙酮酸标准曲线，并通过将每个浓度乘以 2.25，从标准曲线计算丙酮酸浓度。